AVALIAÇÃO DA TOXICIDADE DA ESTERUBINA EM MODELOS ALTERNATIVOS

Abstract

RESUMO: As plantas desde muito tempo são utilizadas na medicina popular, substâncias purificadas e isoladas a partir da matéria-prima vegetal, com estrutura química definida e atividade farmacológica, são denominadas fitofármacos e podem ser usados como ativos em medicamentos com propriedade profilática, paliativa ou curativa. Têm-se aumentado o interesse em explorar propriedades bioquímicas dos metabólicos secundários (MS), os flavonoides são exemplos desses metabólitos e possuem inúmeras propriedades como antioxidantes, antiinflamatórias, anticancerígenas, antivirais e analgésicas. Além de serem responsáveis pela ação farmacológica da planta, alguns desses MS, também podem ser tóxicos, assim testes de toxicidade são de extrema importância e nesse contexto o estudo teve objetivo de avaliar a toxicidade da esterubina em modelos in sílico, in vitro e in vivo. Para avaliação in sílico foi utilizada a plataforma ADMETLab 3.0, onde o smile da substância foi adicionado e a partir disso dados físico-químicos e de toxicidade foram coletados. Para avaliação in vitro da toxicidade foi realizado o teste de hemólise, onde foram utilizados eritrócitos de Canis lupus familiaris, com análise em triplicata as amostras foram centrifugadas a 3000 rpm por 5 minutos e quantificada a presença de hemoglobina, na análise in vitro da toxicidade pelo método MTT foram utilizadas linhagens celulares L929 (fibroblastos de camundongos) e B16F10 (melanoma murino) e avaliados quanto a viabilidade celular. Para realização dos testes in vivo foram utilizadas larvas de Zophobas morio a análise foi feita em duplicata com diluição da substância para obtenção das doses de 3, 30 e 300 mg/kg, que são doses já preconizadas para o teste de toxicidade, e foram administradas na hemocele do tenébrio sendo verificadas a melanização e sobrevivência. A previsão de toxicidade pelo ADMETlab 3.0 trouxe resultados promissores, mostrando a molécula de esterubina com valores favoráveis de propriedades como genotoxicidade, mutagenicidade no teste AMES, irritação ocular, e valores com toxicidade média que não impedem seu uso, mas merecem atenção especial como carcinogenicidade. No teste de hemólise os resultados foram positivos apresentando porcentagem menor que 10%. Na avaliação de citotoxicidade pelo método MTT, a molécula teve eficácia em reduzir a viabilidade quando comparadas ao controle negativo assim como também o valor de IC50 de 15,07 μg/mL (12,55 a 18,10 μg/mL) em células B16F10, mostrando também um bom potencial em reduzir a viabilidade nessa linhagem celular. No teste in vivo com larvas de Zophobas morio apresentou boa taxa de sobrevivência em doses maiores de 30 e 300 mg/kg, demonstrando segurança. Com base nos resultados a esterubina se mostra uma molécula promissora com bom perfil de segurança demonstrado nos testes in sílico, in vitro e in vivo se mostrando segura para futuros testes in vivo que possam vir a serem realizados para evidenciar suas possíveis atividades farmacológicas. ABSTRACT: Plants have long been used in folk medicine. Purified substances isolated from plant raw materials, with a defined chemical structure and pharmacological activity, are called phytopharmaceuticals and can be used as active ingredients in medicines with prophylactic, palliative or curative properties. There has been increasing interest in exploring the biochemical properties of secondary metabolites (SM). Flavonoids are examples of these metabolites and have numerous properties such as antioxidants, anti-inflammatory, anticancer, antiviral and analgesics. In addition to being responsible for the pharmacological action of the plant, some of these SM can also be toxic, so toxicity tests are extremely important and in this context the study aimed to evaluate the toxicity of sterubin in in silico, in vitro and in vivo models. For in silico evaluation, the ADMETLab 3.0 platform was used, where the substance's smile was added and from this, physicochemical and toxicity data were collected. For in vitro toxicity evaluation, the hemolysis test was performed, where Canis lupus familiaris erythrocytes were used, with analysis in triplicate. The samples were centrifuged at 3000 rpm for 5 minutes and the presence of hemoglobin was quantified. In the in vitro toxicity analysis by the MTT method, L929 (mouse fibroblasts) and B16F10 (murine melanoma) cell lines were used and evaluated for cell viability. To perform the in vivo tests, Zophobas morio larvae were used. The analysis was performed in duplicate with dilution of the substance to obtain doses of 3, 30 and 300 mg/kg, which are doses already recommended for the toxicity test, and were administered in the hemocoel of the tenebrio, verifying melanization and survival. The toxicity prediction by ADMETlab 3.0 brought promising results, showing the sterubin molecule with favorable values of properties such as genotoxicity, mutagenicity in the AMES test, eye irritation, and values with medium toxicity that do not prevent its use, but deserve special attention as carcinogenicity. In the hemolysis test, the results were positive, with a percentage lower than 10%. In the cytotoxicity evaluation by the MTT method, the molecule was effective in reducing viability when compared to the negative control, as well as the IC50 value of 15.07 μg/mL (12.55 to 18.10 μg/mL) in B16F10 cells, also showing good potential in reducing viability in this cell line. In the in vivo test with Zophobas morio larvae, it showed a good survival rate at doses higher than 30 and 300 mg/kg, demonstrating safety. Based on the results, sterubin is a promising molecule with a good safety profile demonstrated in in silico, in vitro and in vivo tests, proving safe for future in vivo tests that may be performed to demonstrate its possible pharmacological activities.