POTENCIAL ANTINOCICEPTIVO E ANTI-INFLAMATÓRIO DO ISOPULEGOL E POSSÍVEIS MECANISMOS DE AÇÃO EM ROEDORES.

Abstract

RESUMO: O isopulegol (ISO) (p-Menth-8-en-3-ol) é um monoterpeno álcool, presente em óleos essenciais de várias plantas aromáticas, como Corymbia citriodora H.; Zanthoxylum schinifolium L. e Melissa officinalis L., essas plantas são utilizadas na medicina popular como antiespasmódica, curativo cirúrgico para feridas, sedativo/hipnótico, fortalecimento da memória e alívio da dor de cabeça induzida por estresse. Estudos anteriores mostraram que o isopulegol apresenta atividade ansiolítica, anticonvulsivante, gastroprotetora e antioxidante em roedores, mas até agora não existem estudos que comprovam atividade do isopulegol em modelos de nocicepção e na inflamação. O objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito antinociceptivo e anti-inflamatório do ISO, bem como possíveis mecanismos de ação envolvidos nos efeitos observados em roedores. Foram utilizados camundongos Swiss machos e fêmeas (20-35 g, n = 5-8) e ratos Wistar fêmeas (180-250 g, n = 5-8). Para avaliar a atividade antinociceptiva do ISO foram realizados os testes de nocicepção induzida por formalina, capsaicina e glutamato, no modelo de lambedura de pata, seguidos da investigação do envolvimento dos mecanismos opióides, canais de , muscarínicos, L-argininaóxido- nítrico e GMPc. Foi avaliado também a hiperalgesia induzida por carragenina e prostaglandina E2 usando o modelo de compressão da pata de ratas (Randall-Selitto). Na investigação da atividade anti-inflamatória foram estudados o efeito antiedematogênico do ISO sobre edema de pata induzido por carragenina, dextrana e PGE2, e sua ação sobre a migração de leucócitos nos modelos de bolsa de ar e peritonite induzida por carragenina em roedores. Nos modelos de nocicepção aguda, o ISO, por via oral, mostrou efeito antinociceptivo nos testes de formalina nas doses de 0,78 (*p<0,05) a 25 mg/kg (***p<0,001) na primeira fase e 1,56(*p<0,05) a 25(***p<0,001) mg/kg na segunda fase do teste; no teste de capsaicina nas doses de 1,56 a 12,5 mg/kg(***p<0,001) e glutamato nas doses de 3,12 a 6,25 mg/kg(***p<0,001) com efeito da dependente dose. A antinocicepção do isopulegol foi inibida na presença de naloxona (2 mg/kg, i.p.; ***p<0,001), glibenclamida (3 mg/kg, i.p.; **p<0,001), atropina (1mg/kg, i.p.; ***p<0,001), L-arginina (600 mg/kg, i.p.; p<0,001) e azul de metileno (20mg/kg, i.p.; **p<0,01). Na dor inflamatória, o ISO (6,25 e 12,5 mg/kg, v.o.) reduziu a hiperalgesia em modelos de hipernocicepção aguda (***p<0,001) induzida por carragenina, quando avaliado no teste de Randall-Selitto. O ISO também apresentou ação anti-hiperalgésica quando administrado por via intraplantar (40 e 80μg/pata, ***p<0,001) na hiperalgesia induzida tanto por carragenina quanto por prostaglandina E2. O ISO (12,5 mg/kg, v.o.) inibiu a formação de edema induzido por carragenina da 1ª a 6ª horas, ***p<0,001; e atenuou o edema de pata induzido por dextrana,***p<0,001; e prostaglandina E2, ***p<0,001 comparado ao controle. Na avaliação da migração leucocitária induzida por carragenina em bolsa de ar, o ISO (6,25 e 12,5 mg/kg, v.o.) reduziu significativamente (***p<0,001) a migração de leucócitos para o local da injúria, assim como no modelo de peritonite. O ISO reduz ***p<0,001, a atividade da enzima MPO no exsudado da bolsa de ar induzida por carragenina. Os resultados sugerem que a ação antinociceptiva aguda do ISO envolva o sistema opióide via canais de , participação de receptores muscarínicos, inibição de óxido nítrico e GMPc. As ações, anti-inflamatória e anti-hiperalgésica, do ISO parecem estar relacionadas com a inibição da produção ou liberação de mediadores pró-inflamatórios e da migração de leucócitos.-----------------------ABSTRACT The isopulegol (ISO) (p-Menth-8-en-3-ol) is a monoterpene alcohol, present in essential oils of various aromatic plants, as Corymbia citriodora H.; Zanthoxylum schinifolium L. and Melissa officinalis L., these plants are used in folk medicine as antispasmodic, surgical dressing for wounds, and sedative / hypnotic, strengthening memory and relieving headache induced by stress. Previous studies have shown that the isopulegol has anxiolytic activity, anticonvulsant, gastroprotective and antioxidant in rodents, but so far there are no studies showing activity of isopulegol in nociception models and inflammation. The aim of this study was to evaluate the analgesic effect and anti-inflammatory effects of ISO, as well as possible mechanisms involved in the effects observed in rodents. Swiss male and female mice were used (20-35 g, n=5-8) and female Wistar rats (180-250 g, n=5-8). To evaluate the ISO antinociceptive activity were performed the nociception induced by formalin test, capsaicin and glutamate in paw licking model, followed by investigation of the involvement of opioid mechanisms, K+ ATP channels , muscarinic, L- arginine-nitric oxide and cGMP. It was also evaluated hyperalgesia induced by carrageenin and prostaglandin E2 using a compression model of the rat paw (Randall-Selitto). In the investigation of anti-inflammatory activity have been studied the antiedematogenic effect of ISO on paw edema induced by carrageenan, dextran and PGE2, and its effect on the migration of leukocytes into the air pouch model and carrageenan-induced peritonitis in rodents. In models of acute nociception, ISO orally showed antinociceptive effect in the formalin test at doses of 0.78 (*p<0.05) at 25 mg/kg (***p<0.001) in the first phase and 1.56 (*p<0.05) 25 mg/kg (***p<0.001) during the second test phase; the capsaicin test at doses from 1.56 to 12.5 mg/kg (***p<0.001) and glutamate in doses from 3.12 to 6.25 mg/kg (***p<0.001) in effect dose dependent. The isopulegol of antinociception was inhibited in the presence of naloxone (2 mg/kg, i.p.; ***p<0.001), glibenclamide (3 mg/kg, i.p.; **p<0.001), atropine (1mg/kg i.p.; ***p<0.001), L-arginine (600 mg / kg, ip; p<0.001) and methylene blue (20 mg/kg, i.p.; **p<0.01). In inflammatory pain, ISO (6.25 and 12.5 mg/kg, p.o.) reduced the hyperalgesia in models of acute hyperalgesia (***p<0.001) induced by carrageenan, when measured in the Randall-Selitto test. ISO also showed anti-hyperalgesic action when administered by intraplantar route (40 and 80μg/paw, ***p<0.001) in both hyperalgesia induced by carrageenan as prostaglandin E2. The ISO (12.5 mg/kg, p.o.) inhibited edema formation induced by carrageenin 1st to 6th hours, ***p<0.001; and attenuated paw edema induced by dextran, ***p<0.001; and prostaglandin E2, ***p<0.001 compared to the control. In the evaluation of leukocyte migration induced by carrageenan air bag, ISO (6.25 and 12.5 mg/kg, p.o.) significantly (***p<0.001) the migration of leukocytes to the site of injury, as well as in peritonitis model. ISO reduces ***p<0.001, MPO enzyme activity in the air pouch exudate induced by carrageenan. The results suggest that acute antinociceptive ISO involves the opioid system via K+ ATP channels, participation of muscarinic receptors, inhibiting nitric oxide and cGMP. ISO anti-inflammatory and antihyperalgesic actions appear to be related to inhibiting the production or release of pro-inflammatory mediators of leukocyte migration.