AVALIAÇÃO DOS EFEITOS DA UROSPERMIA SOBRE A VIABILIDADE ESPERMÁTICA DE GARANHÕES.

Abstract

RESUMO: Urospermia é a contaminação do sêmen com urina e uma condição que pode reduzir a fertilidade do garanhão. O objetivo foi avaliar a viabilidade do sêmen contaminado com urina através da avaliação quanto à motilidade e à função espermáticas. No primeiro experimento, foram realizadas 5 coletas de sêmen de 8 garanhões, totalizando 40 ejaculados. No segundo experimento, foram realizadas 5 coletas de sêmen de 5 garanhões, totalizando 25 ejaculados. Imediatamente após a coleta do sêmen, foi mensurado o pH, os níveis de uréia, creatinina e determinada a concentração espermática. O sêmen foi então alocado em frascos cônicos de 50 mL. Adicionou-se 10 mL de sêmen bruto ao frasco “controle” (CON), 8 mL de sêmen bruto ao frasco de "baixa contaminação" (BAIXA) e 5 mL de sêmen bruto ao frasco de "alta contaminação" (ALTA). Foram adicionados 2 mL de urina a cada frasco de "baixa contaminação", e 5 mL de urina foram adicionados a cada frasco de "alta contaminação". Uma vez que o sêmen foi exposto à urina por 2 minutos, cada um dos frascos foi diluído para 40 mL com um diluidor de sêmen. Em seguida, adicionou-se 1 mL de solução de "cushion" no fundo de cada frasco cônico. Todos os tubos foram então centrifugados. Após a centrifugação, o sobrenadante e a solução de "cushion" foram aspirados e descartados; no segundo experimento, foi preparado um gradiente de densidade em cada frasco e o gradiente centrifugado, após o que o sobrenadante foi descartado. O sedimento de sêmen remanescente foi ressuspenso para uma concentração final de 200 milhões de espermatozoides / mL. O sêmen foi então armazenado manualmente em palhetas de 0,5 mL e depois arrefecido a 5 ° C durante 20 minutos. Para congelamento, o sêmen foi então colocado a 4 cm acima do nitrogênio líquido durante 15 minutos antes de ser mergulhado em nitrogênio líquido. Em ambos os experimentos, houve uma redução significativa na motilidade total e progressiva do sêmen com aumento da contaminação da urina no pré-congelamento. No primeiro experimento, a viabilidade do sêmen pósdescongelamento foi significativamente menor no grupo ALTA do que nos grupos CON e BAIXA, enquanto que no segundo experimento, a viabilidade do sêmen pós-descongelamento foi semelhante nos grupos CON, BAIXA e ALTA. No segundo experimento, foi verificado uma maior seleção de espermatozoides morfologicamente normais após a centrifugação com o gradiente de densidade. Conclui-se que a centrifugação com “cushion” pode melhorar a qualidade do sêmen com baixa contaminação com urina e que a centrifugação com gradiente de densidade pode melhorar a qualidade do sêmen com alta contaminação por urina. --------------- ABSTRACT Urospermia is the contamination of semen with urine and a condition that can reduce the fertility of the stallion. The objective was to evaluate the viability of semen contaminated with urine through evaluation of sperm motility and function. In the first experiment, 5 semen collections of 8 stallions were performed, totaling 40 ejaculates. In the second experiment, 5 semen collections of 5 stallions were performed, totaling 25 ejaculates. Immediately after semen collection, pH, urea levels, creatine and sperm concentration were measured. The semen was then allocated in 50 mL conical tubes. 10 mL of fresh semen was added to the control tube (CON), 8 mL of fresh semen was added to the "low contamination" (LOW) tube and 5 mL of fresh semen was added to the "high contamination” (HIGH) tube. 2 mL of urine was added to each LOW "lowcontamination" tube, and 5 mL of urine was added to each HIGH "high-contamination" tube. Once the semen was exposed to urine for 2 minutes, each of the tubes was extended to 40 mL with a semen extender. Thereafter, 1 mL of "cushion" solution was added to the bottom of each conical tubes. All tubes were then centrifuged. After centrifugation, the supernatant and "cushion" solution were aspirated and discarded; for the second experiment, a density gradient was prepared in each tube and the gradient centrifuged, after which the supernatant was discarded. The remaining sperm pellet was resuspended to a final concentration of 200 million sperm / mL. The semen was then loaded manually into 0.5 mL straws and then cooled at 5øC for 20 minutes. For freezing, the semen was then placed 4 cm above the liquid nitrogen for 15 minutes before being dipped in liquid nitrogen. In both experiments, there was a significant reduction in total and progressive semen motility with increased pre-freeze urine contamination. In the first experiment, post-thaw semen viability was significantly lower in the HIGH group than in the CON and LOW groups, whereas in the second experiment, post-thaw semen viability was similar in the CON, LOW and HIGH groups. In the second experiment, a greater selection of morphologically normal spermatozoa was observed after centrifugation with the density gradient. It is concluded that cushion centrifugation can improve semen quality with low urine contamination and that density gradient centrifugation can improve the quality of semen with high urine contamination.