AVALIAÇÃO MULTIDIMENSIONAL DO MÉTODO DE ACELERAÇÃO CICATRICIAL (MAC)® NO TRATAMENTO DA LEISHMANIOSE TEGUMENTAR: abordagens clínicas histipatológicas e imunológicas

Abstract

RESUMO: As leishmanioses são zoonoses causadas por protozoários do gênero Leishmania, com manifestações clínicas variadas, onde o tratamento convencional enfrenta limitações como elevada toxicidade, custo alto, necessidade de administração parenteral prolongada e baixa continuidade por parte do paciente. Diante da necessidade de terapias mais seguras, acessíveis e de aplicação simplificada, o Método de Aceleração Cicatricial (MAC®) surge como uma abordagem de terapia fotodinâmica não invasiva, que combina um agente fotossensibilizador (FS) com irradiação por Luz Emitida por Diodo (LED) para promover estimulação tecidual. O objetivo da presente pesquisa foi avaliar a atividade antileishmania, a citotoxicidade e parâmetros de ativação de macrófagos do MAC® e seus efeitos terapêuticos no tratamento da Leishmaniose Tegumentar (LT) em camundongos BALB/c. A metodologia do presente trabalho compreendeu abordagens in vitro e in vivo para avaliação da atividade biológica e da segurança do tratamento proposto. In vitro, foram realizados ensaios de atividade contra formas promastigotas, testes de citotoxicidade em macrófagos peritoneais e em eritrócitos de carneiro, bem como a avaliação contra amastigotas internalizadas em macrófagos. Adicionalmente, investigou-se a ativação de macrófagos por meio da análise da atividade lisossomal, da capacidade fagocítica e da produção de óxido nítrico. Também foram conduzidos ensaios de toxicidade aguda, pigmentação e dosagem de nitrito utilizando larvas de Zophobas morio. In vivo, a metodologia incluiu a avaliação clínica das lesões, a determinação da carga parasitária, a quantificação de nitrito e citocinas, além de análises laboratoriais e histopatológicas, visando à caracterização da eficácia terapêutica e dos possíveis efeitos sistêmicos do tratamento. Os resultados in vitro demonstraram que os tratamentos inibiram formas promastigotas do parasito dependente da concentração e do tempo de exposição a luz. O MAC® apresentou alta eficácia contra amastigotas internalizadas em macrófagos, com uma concentração inibitória média (CI50) de 10,92 segundos, além de índice de seletividade contra o parasito (>25) e capacidade de ativar a fagocitose em macrófagos, sem toxicidade observada para eritrócitos de carneiro. Em relação à segurança, o MAC® reduziu a viabilidade em apenas 20% das larvas de Zophobas morio. Nos ensaios in vivo, os camundongos BALB/c tratados com MAC® apresentaram uma redução significativa das lesões ulcerativas e da carga parasitária em 83%. Já na quantificação das citocinas, observou-se elevação dos níveis de IL-10 nos grupos azul de metileno (AM),

LED, MAC® e MAC® + Anfotericina B (Anf B), sugerindo modulação imunológica anti- inflamatória. Em relação a quantificação de enzimas séricas, foi observado que apenas o grupo

tratado com Anfotericina B 3%, exibiu sinais de nefrotoxicidade. Conclui-se, portanto, que o

MAC® atua nas diferentes formas evolutivas do parasito, além de ativar macrófagos, configurando-se como uma abordagem terapêutica promissora para a Leishmaniose Tegumentar, por sua acessibilidade econômica e praticidade de aplicação, quando comparado ao tratamento medicamentoso. Sua aplicação é restrita a profissionais habilitados sendo capaz de acelerar a cicatrização, reduzir a carga parasitária e apresentar menor toxicidade em comparação ao tratamento convencional. ABSTRACT: Leishmaniasis is a zoonotic disease caused by protozoa of the genus Leishmania, with diverse clinical manifestations. Conventional treatment faces limitations such as high toxicity, high cost, the need for prolonged parenteral administration, in addition the low patient adherence. Having regard to the need for safer, more accessible, and simpler therapies, the Scar Acceleration Method (MAC®) emerges as a non-invasive photodynamic therapy approach that combines a photosensitizing agent (PA) with Light Emitting Diode (LED) irradiation to promote tissue stimulation. The objective of this research was to evaluate the antileishmanial activity, cytotoxicity, and macrophage activation parameters of MAC® and its therapeutic effects in the treatment of cutaneous leishmaniasis (CL) in BALB/c mice. The methodology of this work consisted of in vitro and in vivo approaches to evaluate the biological activity and safety of the proposed treatment. In vitro assays were performed to assess activity against promastigote forms, cytotoxicity tests in peritoneal macrophages and sheep erythrocytes, as well as evaluation against amastigotes internalized in macrophages. Additionally, macrophage activation was investigated through analysis of lysosomal activity, phagocytic capacity, and nitric oxide production. Acute toxicity, pigmentation, and nitrite dosage assays were also conducted using Zophobas morio larvae model. In vivo, the methodology included clinical evaluation of lesions, determination of parasite load, quantification of nitrite and cytokines, as well as laboratory and histopathological analyses, aiming at characterizing the therapeutic efficacy and possible systemic effects of the treatment. The in vitro results showed that the treatments inhibited promastigote forms of the parasite depending on the concentration and time of exposure to light. MAC® demonstrated high efficacy against amastigotes internalized in macrophages, with a mean inhibitory concentration (IC50) of 10.92 seconds, in addition to a selectivity index against the parasite (>25) and the ability to activate phagocytosis in macrophages, without observed toxicity to sheep erythrocytes. Regarding safety, MAC® reduced the viability of Zophobas morio larvae by only 20%. In in vivo assays, BALB/c mice treated with MAC® showed a significant reduction in ulcerative lesions and parasite load by 83%. In cytokine quantification, elevated IL-10 levels were observed in the methylene blue

(MB), LED, MAC®, and MAC® + Amphotericin B (Amp B) groups, suggesting anti- inflammatory immune modulation. Regarding the quantification of serum enzymes, it was

observed that only the group treated with Amp B 3% presented signs of nephrotoxicity. It is concluded, therefore, that MAC® acts on the different evolutionary forms of the parasite, in addition to activating macrophages, thus configuring itself as a promising therapeutic approach

for cutaneous leishmaniasis, due to its economic accessibility and ease of application when compared to drug treatment. Its application is restricted to qualified professionals and is able of accelerating healing, reducing the parasitic load, and presenting lower toxicity compared to conventional treatment.