SÊMEN BOVINO CRIOPRESERVADO COM DILUIDOR TRIS-GEMA SUPLEMENTADO DE HIDROXIPROPILMETILCELULOSE E GOMA DE CAJAZEIRA

Abstract

RESUMO: Objetivou-se avaliar e comparar as características de qualidade de sêmen criopreservado com diferentes concentrações de hidroxipropilmetilcelulose e goma de cajá. Foram coletados sete touros em triplicata, por eletroejaculação e avaliado quanto aos aspectos macroscópicos e

microscópicos. As amostras foram submetidas a diluição em meio de criopreservação Tris- gema com e sem glicerol, dividas em dois experimentos. O experimento I sendo subdividido

nos tratamentos: Controle: Tris-Gema + 6% glicerol; T1: Tris-Gema + 3% glicerol; T2: Tris- Gema + 0% glicerol; T3: Tris-Gema + 0,5% HPMC; T4: Tris-Gema + 1,0% HPMC; T5: Tris- Gema + 1,5% HPMC e T6: Tris-Gema + 5,5% glicerol + 0,5% HPMC; E, o experimento II,

dividido nos grupos: Controle: Tris-Gema + 6% glicerol; T1: Tris-Gema + 3% glicerol; T2: Tris-Gema + 0% glicerol; T3: Tris-Gema + 0,5% goma de cajá; T4: Tris-Gema + 1,5% goma de cajá; T5: Tris-Gema + 5,5% glicerol + 0,5% goma de cajá; As amostras foram congeladas e após descongelamento foram avaliadas quanto aos testes de termorresistência rápido (TTRR), morfologia espermática, integridade de membrana plasmática, atividade mitocondrial e teste de fertilização in vitro. Para análise de dados foram utilizados os procedimentos usuais de estatística descritiva, tais como distribuição de frequência absoluta (n) e relativa (%), média e desvio padrão, bem como o teste Shapiro-Wilk para verificar se os dados seguiram distribuição normal. Para os dados sem distribuição normal foi utilizado a transformação pela fórmula arc.sen(√x/100). Os dados de membrana plasmática, atividade mitocondrial e expansão hiposmótica, foram submetidos a análise de variância (ANOVA), e para as análises de produção in vitro, foi aplicado o teste de Kruskal-Wallis. Os dados foram digitados no Excel e analisados a nível de significância de 5% (p<0,05), no programa InfoStat versão 2008. O TTRR do Experimento I e II demonstraram que o grupo controle apresentou melhores resultados de motilidade e vigor nos tempos 0’, 15’ e 30' quando comparado com os respectivos tratamentos experimentais. O grupo T6 do Experimento I apresentou melhores resultados de motilidade e vigor que os demais grupos acrescidos de 0,5%, 1,0% e 1,5% de HPMC ao diluidor. O grupo T5 do Experimento II apresentou melhores resultados de motilidade e vigor que os demais grupos acrescidos de goma de cajá ao diluidor seminal. Em ambos os experimentos, não houve diferença significativa no tempo 45’ do TTRR, nos testes de expansão hiposmótica, morfologia espermática, integridade de membrana, atividade mitocondrial e taxa de fertilização in vitro com espermatozoides criopreservados em meio de congelação acrescido de diferentes concentrações de hidroxipropilmetilcelulose e goma de cajá. ABSTRACT: The objective of this study was to evaluate and compare the quality characteristics of cryopreserved semen with different concentrations of hydroxypropylmethylcellulose and cashew gum. Seven bulls were collected in triplicate by electroejaculation and evaluated for macroscopic and microscopic aspects. The samples were subjected to dilution in Tris-yolk cryopreservation medium with and without glycerol, divided into two experiments. Experiment I was subdivided into the following treatments: Control: Tris-Yolk + 6% glycerol; T1: Tris-Yolk + 3% glycerol; T2: Tris-Yolk + 0% glycerol; T3: Tris-Yolk + 0.5% HPMC; T4: Tris-Yolk + 1.0% HPMC; T5: Tris-Yolk + 1.5% HPMC and T6: Tris-Yolk + 5.5% glycerol + 0.5% HPMC; And, experiment II, divided into groups: Control: Tris-Yolk + 6% glycerol; T1: Tris-Yolk + 3% glycerol; T2: Tris-Yolk + 0% glycerol; T3: Tris-Yolk + 0.5% cajá gum; T4: Tris-Yolk + 1.5% cajá gum; T5: Tris-Yolk + 5.5% glycerol + 0.5% cajá gum; The samples were frozen and after thawing they were evaluated for rapid thermoresistance tests (RRT), sperm morphology, plasma membrane integrity, mitochondrial activity and in vitro fertilization test. For data analysis, the usual descriptive statistics procedures were used, such as absolute (n) and relative (%) frequency distribution, mean and standard deviation, as well as the Shapiro-Wilk test to verify whether the data followed a normal distribution. For data without normal distribution, transformation by the formula arc.sen(√x/100) was used. Data on plasma membrane, mitochondrial activity and hyposmotic expansion were subjected to analysis of variance (ANOVA), and the Kruskal-Wallis test was applied for in vitro production analyses. Data were entered into Excel and analyzed at a significance level of 5% (p<0.05) using the InfoStat program, version 2008. The TTRR of Experiments I and II demonstrated that the control group presented better motility and vigor results at times 0’, 15’ and 30’ when compared with the respective experimental treatments. Group T6 of Experiment I presented better motility and vigor results than the other groups added with 0.5%, 1.0% and 1.5% of HPMC to the extender. Group T5 of Experiment II showed better motility and vigor results than the other groups that added cashew gum to the seminal extender. In both experiments, there was no significant difference in the 45’ time of the TTRR, in the hyposmotic expansion tests, sperm morphology, membrane integrity, mitochondrial activity and in vitro fertilization rate with sperm cryopreserved in freezing medium added with different concentrations of hydroxypropylmethyl cellulose and cashew gum.