EFEITO DA SUPLEMENTAÇÃO DE ANTIOXIDANTES AO TRIS-GEMA SOBRE A VIABILIDADE ESPERMÁTICA DO SÊMEN CAPRINO PÓS CRIOPRESERVAÇÃO

Abstract

RESUMO: Biotecnicas da reprodução como o congelamento de sêmen podem agregar melhoramento genético. Entretanto, reações de oxidação acabam baixando a taxa de viabilidade espermática pós descongelação. O β-cariofileno é um sesquiterpeno com atividades biológicas, destacando-se a atividade anti-inflamatória e antioxidante. O ácido elágico (AE) é um dímero do ácido gálico apresentando quatro anéis fundidos com quatro hidroxilas, de forte atividade antioxidante. Objetivou-se analisar efeitos antioxidantes e viabilidade espermática do sêmen caprino criopreservado em tris-gema suplementado com diferentes concentrações de β-cariofileno e diferentes concentrações e purezas de AE. Foram realizadas coletas semanais durante sete semanas, totalizando sete ejaculados de bodes da raça anglonubiana por coleta. Após avaliação e formação do pool, este foi divido em quatro alíquotas para avaliação da atividade do β-cariofileno, correspondentes ao grupo tratamento respectivo: controle-0mM, B1-1,0 mM, B2-2,0 mM e B3-3,0 mM; e em sete alíquotas para avaliação da atividade do AE 90% de pureza: controle-0Mm, A1-0,5 mM, A2-1,0mM, A3-2,0mM e AE 95% de pureza: D1- 0,5mM, D2-1,0mM e D3-2,0mM. Avaliaram-se a integridade da membrana plasmática, integridade acrossomal, potencial de membrana mitocondrial, cinética espermática (CASA), Teste de Termo Resistência (TTR) e detecção de espécies reativas ao oxigênio (ROS). Os resultados foram submetidos à análise de variância (ANOVA) e ao teste Kruskal Wallis para os resultados não paramétricos. Não houveram diferenças significativas (p<0,05) em relação ao controle, entre os resultados obtidos para as variáveis e tratamentos estudados pós descongelação β-cariofileno. Entretanto, observou-se redução significativa (p>0,05) dos parâmetros motilidade e vigor no TTR e cinética CASA nas concentrações A3 e D3 e, redução no potencial de membrana mitocondrial na concentração A3 e concentrações D2 e D3, quando comparados ao controle. Ambos os antioxidantes estudados não reduziram significativamente a produção de ROS. A suplementação das concentrações de β-cariofileno adotadas neste estudo ao diluidor tris-gema não provocaram efeitos na qualidade espermática do sêmen caprino anglonubiano, enquanto, em maiores concentrações do AE (1,0mM e 2mM) causa a diminuição da viabilidade espermática.

ABSTRACT: Reproduction biotechnics such as semen freezing can add genetic improvement. However, oxidation reactions lower the rate of sperm viability after thawing. Β- caryophyllene is a sesquiterpene with biological activities, with emphasis on antiinflammatory and antioxidant activity. Ellagic acid (EA) is a dimer of gallic acid having four fused rings with four hydroxylates, with a strong antioxidant activity. The objective of this study was to analyze antioxidant effects and sperm viability of cryopreserved goat semen in egg-yolk supplemented with different concentrations of β-caryophyllene and different concentrations and purities of EA. Weekly collections were carried out for seven weeks, totaling seven ejaculates of anglonubian herds by collection. After evaluation and formation of the pool, it was divided into four aliquots to evaluate β- caryophyllene activity, corresponding to the respective treatment group: control-0mM, B1-1,0mM, B2-2,0mM and B3-3,0 mM; and in seven aliquots for assessment of 90% purity EA activity: control -0mM, A1-0,5mM, A2-1,0mM, A3-2,0mM and 95% purity EA: D1-0,5mM, D2-1,0mM and D3-2,0mM. Plasma membrane integrity, acrosomal integrity, mitochondrial membrane potential, sperm kinetics (CASA), Thermo Resistance Test (TTR) and detection of oxygen reactive species (ROS) were evaluated. The results were submitted to analysis of variance (ANOVA) and Kruskal Wallis test for the non-parametric results. There were no significant differences (p <0,05) in relation to the control, among the results obtained for the variables and treatments studied after β-caryophyllene thawing. However, there was a significant (p> 0,05) reduction of the motility and vigor parameters in the TTR and CASA kinetics at concentrations A3 and D3 and reduction in mitochondrial membrane potential at A3 concentration and D2 and D3 concentrations, when compared to the control. Both antioxidants studied did not significantly reduce ROS production. The supplementation of the β-caryophyllene concentrations adopted in this study to the egg-yolk diluent had no effect on the sperm quality of the anglonuban goat semen, whereas, in higher concentrations EA (1,0 mM and 2,0 mM) decreases sperm viability.