ESTUDO QUÍMICO E BIOLÓGICO DA ESPÉCIE Machaerium acutifolium VOGEL

Abstract

RESUMO: A espécie Machaerium acutifolium Vogel (Fabaceae-Papilionoideae), sin. M. muticum Benth, conhecida popularmente por jacarandá do campo e jacarandá bico de pato, é utilizada tradicionalmente como anticoncepcional, para tratar menstruação dolorosa e dor de estômago. Folhas e galhos desta espécie foram submetidos a maceração com etanol, fornecendo os extratos etanólico das folhas (EEFMa) e galhos (EEGMa). O EEFMa, após partição, forneceu as frações hexânica (FHFMa), acetato de etila (FAEFMa) e aquosa (FAFMa), enquanto o EEGMa, após filtração em coluna filtrante de gel de sílica, forneceu as frações hexânica (FHGMa), clorofórmica (FCGMa), acetato de etila (FAEGMa), metanólica (FMGMa) e metanol-água (FMAGMa). A FHFMa contém o α-tocoferol (1), colesterol (2), campesterol (3), sitosterol (4), estigmasterol (5), os triterpenoides lupeol (6), os isômeros E/Z do 3-O-pcumaroil- β-amirina (7 e 8), 3-O-p-cumaroilgermanicol (9 e 10) e 3-O-p-cumaroillupeol (11 e 12). A FAEFMa, após desreplicação por inserção direta em espectrômetro de massas com fonte de ionização por electrospray (DI-ESI-MS/MS), resultou na identificação dos flavonoides quercetina-3-O-ramnosil-(1→2)-[ramnosil-(1→6)]-hexosil-7-O-ramnosídeo (13), quercetina- 3-O-ramnosil-(1→6)-hexosil-7-O-ramnosídeo (14), quercetina-3-O-ramnosil-(1→6)- hexosídeo (15), canferol-3-O-ramnosil-(1→3)-ramnosil-(1→2)-[ramnosil-(1→6)]-hexosil-7- O-ramnosídeo (16), canferol-3-ramnosil-7-[6-feruloil]-hexosil-(1→3)-ramnosídeo (17), canferol-3-O-ramnosil-(1→2)-[ramnosil-(1→6)]-hexosil-7-O-ramnosídeo (18), canferol-3-Oramnosil-( 1→6)-hexosil-7-O-ramnosídeo (19), canferol-3-O-ramnosil-(1→6)-hexosídeo (20), canferol-3-O-hexosídeo (21). A desreplicação, por DI-ESI-MS/MS, da FAFMa, resultou na identificação dos flavonoides 13-16 e 18-21, isoflavonoides genisteína (25) e daidzeína-8-Cglicosídeo (26) e biflavonoide morelloflavona (27). Adicionalmente, foram isolados e identificados da FAFMa os flavonoides: 16, 3',4'-dimetoxi-3-O-β-D-galactopiranosil-(1→6)-α- L-ramnopiranosídeo-7-O-α-L-ramnopiranosilflavonol (22), robinina (23) e astrasikokiosídeo I (24). Este é o primeiro relato do flavonoide 22. As FHGMa e FCGMa contém o esqualeno (28) e a mistura de esteroides 4 e 5, respectivamente. A FAEGMa, após desreplicação por DI-ESIMS/ MS, resultou na identificação de escopoletina (29), (epi)catequina (30), dímero de procianidina A (PAC A) (31), trímeros de PAC A (32-34) e tetrâmero de PAC A (35). A FMGMa, após desreplicação por DI-ESI-MS/MS, permitiu a identificação de 18, 30, 32, 33, 35, ácido quínico (36), biochanina A (37) e dímeros isoméricos de procianidina B1 e/ou B2 (38). Os compostos isolados foram identificados por RMN 1H e 13C (1D e 2D), CG-EM e DIESI- MS/MS. O EEGMa (CE50 56,76±1,54) apresentou atividade antioxidante (AA) superior ao EEFMa, ácido gálico (CE50 13,37±1,65) e BHT (CE50 69,34±5,53), e similar a rutina (CE50 47,06±4,65), no ensaio com o DPPH. Com ABTS, o EEGMa (4,37±0,21) foi mais ativo que o EEFMa (1,18±0,16) e os controles positivos BHT (2,49±0,12) e rutina (1,34±0,4). Os teores de fenóis totais apresentaram correlação positiva com a AA. O teor de flavonoides totais e o fator de proteção solar de EEFMa (66,25±2,94 e 8,2±0,3) foram superiores aos do EEGMa (386,33±0,78 e 4,5±0,2), respectivamente. Apenas o EEGMa apresentou atividade inibidora da acetilcolinesterase. EEFMa e EEGMa não são letais contra as larvas de Aedes aegypti. Os flavonoides 23 e 24 foram quantificados por HPLC-DAD (λ 265 e 348 nm) no EEFMa (66,8±2,0 e 93,8±3,7), FAFMa (127,1±7,9 e 192,2±15,7) e FAEFMa (nd e 3,4±0,3), no entanto, não foram detectados EEGMa, mostrando que a composição química é diferente do EEFMa. Este é o primeiro relato de quantificação dos flavonoides 23 e 24. Os resultados obtidos contribuem para o conhecimento da composição química de M. acutifolium.

ABSTRACT: The species Machaerium acutifolium Vogel (Fabaceae-Papilionoideae), sin. M. muticum Benth, popularly known as wild rosewood and duck bill rosewood, is traditionally used as a contraceptive to treat painful menstruation and stomach pain. Leaves and branches of this species were subjected to maceration with ethanol, providing the ethanolic extracts of leaves (EEFMa) and branches (EEGMa). The EEFMa, after partition, provided the hexane (FHFMa), ethyl acetate (FAEFMa) and aqueous (FAFMa) fractions, while the EEGMa, after filtration through a silica gel filter column, provided the hexane (FHGMa), chloroform (FCGMa), ethyl acetate (FAEGMa), methanol (FMGMa) and methanol-water (FMAGMa). FHFMa contains α- tocopherol (1), cholesterol (2), campesterol (3), sitosterol (4), stigmasterol (5), the triterpenoids lupeol (6), the E/Z isomers of 3-O-p-coumaroyl-β-amyrin (7 and 8), 3-O-pcoumaroylgermanicol (9 and 10) and 3-O-p-coumaroillupeol (11 and 12). FAEFMa, after dereplication by direct insertion in a mass spectrometer with an electrospray ionization source (DI-ESI-MS/MS), resulted in the identification of the flavonoids quercetin-3-O-rhamnosyl- (1→2)-[rhamnosyl-(1→6)]-hexosyl-7-O-rhamnoside (13), quercetin-3-O-rhamnosyl-(1→6)- hexosyl-7-O-rhamnosyl (14), quercetin-3-O-rhamnosyl-(1→6)-hexoside (15), kaempferol-3- O-rhamnosyl-(1→3)-rhamnosyl-(1→2)-[rhamnosyl-(1→6)]-hexosyl-7-O-rhamnoside (16), kaempferol-3-rhamnosyl-7-[6-feruloyl]-hexosyl-(1→3)-rhamnoside (17), kaempferol-3-Orhamnosyl-( 1→2)-[rhamnosyl-(1→6)]-hexosyl-7-O-rhamnoside (18), kaempferol-3-Orhamnosyl-( 1→6)-hexosyl-7-O-rhamnoside (19), kaempferol-3-O-rhamnosyl-(1→6)-hexoside (20), kaempferol-3-O-hexoside (21). Dereplication of FAFMa by DI-ESI-MS/MS resulted in the identification of flavonoids 13-16 and 18-21, isoflavonoids genistein (25) and daidzein-8- C-glycoside (26) and biflavonoid morelloflavone (27). Additionally, the following flavonoids were isolated and identified from FAFMa: 16, 3',4'-dimethoxy-3-O-β-D-galactopyranosyl- (1→6)-α-L-rhamnopyranoside-7-O-α-L-rhamnopyranosylflavonol (22), robinin (23) and astrasikokioside I (24). This is the first report of flavonoid 22. FHGMa and FCGMa contain squalene (28) and a mixture of steroids 4 and 5, respectively. FAEGMa, after dereplication by DI-ESI-MS/MS, resulted in the identification of scopoletin (29), (epi)catechin (30), procyanidin A dimer (PAC A) (31), PAC A trimers (32-34) and PAC A tetramer (35). FMGMa, after dereplication by DI-ESI-MS/MS, allowed the identification of 18, 30, 32, 33, 35, quinic acid (36), biochanin A (37) and isomeric dimers of procyanidin B1 and/or B2 (38). Isolated compounds were identified by 1H and 13C NMR (1D and 2D), GC-MS and DI-ESI-MS/MS. EEGMa (EC50 56.76±1.54) showed antioxidant activity (AA) superior to EEFMa, gallic acid (EC50 13.37±1.65) and BHT (EC50 69.34±5.53), and similar to rutin (EC50 47.06±4.65), in the DPPH assay. With ABTS, EEGMa (4.37±0.21) was more active than EEFMa (1.18±0.16) and positive controls BHT (2.49±0.12) and rutin (1.34±0.4). The levels of total phenols showed a positive correlation with AA. The total flavonoid content and the sun protection factor of EEFMa (66.25±2.94 and 8.2±0.3) were higher than those of EEGMa (386.33±0.78 and 4.5±0.2), respectively. Only EEGMa showed acetylcholinesterase inhibitory activity. EEFMa and EEGMa are not lethal against Aedes aegypti larvae. Flavonoids 23 and 24 were quantified by HPLC-DAD (λ 265 and 348 nm) in EEFMa (66.8±2.0 and 93.8±3.7), FAFMa (127.1±7.9 and 192, 2±15.7) and FAEFMa (nd e 3.4±0.3), however, EEGMa were not detected, showing that the chemical composition is different from EEFMa. This is the first report on the quantification of flavonoids 23 and 24. The results obtained contribute to the knowledge of the chemical composition of M. acutifolium.