LÍQUIDO DA CASCA DA CASTANHA DO CAJU (Anarcadium occidentale L.) (LCC) E SEUS PRINCIPAIS CONSTITUINTES: atividades anti-leishmania, toxicológica e imunomoduladora

Abstract

RESUMO: As leishmanioses são doenças negligenciadas endêmicas em 98 países, constituindo um grande problema de saúde pública devido à sua alta incidência e letalidade. Estima-se que ocorram entre 700.000 a 1 milhão de novos casos de leishmaniose cutânea e 50.000 a 90.000 novos casos de leishmaniose visceral em todo o mundo a cada ano. Tem como agente etiológico mais de 20 espécies do gênero Leishmania, transmitidas por espécies diferentes de flebotomíneos dos gêneros Lutzomyia e Phlebotomus. Os tratamentos convencionais causam efeitos adversos graves, baixa tolerância, desenvolvimento de cepas resistentes, além de serem onerosos. Nesse contexto, os produtos naturais têm sido investigados na busca por novas alternativas terapêuticas. O líquido da casca da castanha do caju (LCC), um dos principais subprodutos do cajueiro, é uma fonte natural de compostos fenólicos, como ácido anacárdico (AA), cardanol (CN) e cardol (CD), e apresenta atividades antioxidantes, antiinflamatórias, antimicrobianas, antitumorais, larvicidas e inseticidas. Seus derivados também são amplamente explorados isoladamente, principalmente quanto às suas propriedades como antibacterianas, antioxidantes, antifúngicas, antitumorais, entre outras. O objetivo deste estudo foi avaliar as atividades anti-Leishmania, citotóxica e imunomoduladora do LCC, AA, CN e CD. Para tanto, foram realizados protocolos de atividade anti-Leishmania sobre formas promastigotas de L. infantum, L. braziliensis e L. major, citotoxicidade sobre macrófagos murinos, bem como avaliação de macrófagos infectados com L. infantum. Ainda foram realizados ensaios de imunomodulação como atividade lisossomal, capacidade fagocítica e avaliação da indução na produção de óxido nítrico em macrófagos, bem como avaliação da toxicidade aguda sobre Tenebrio molitor. As substâncias testadas demonstraram potencial anti-Leishmania, e os valores de concentração inibitória média (CI50) do LCC, AA, CN e CD contra L. infantum foram: 148,12; 106,45; 56,74 e 154,32 μg/mL, contra L. braziliensis foram: 85,71; 50,83; 64,28 e 137,05 μg/mL, e contra L. major foram: 153,56; >800; 122,31 e 112,50 μg/mL, respectivamente. Na ação sobre os macrófagos, as concentrações médias de citotoxicidade (CC50) do LCC, AA, CN e CD foram 37,51;12,59; 31,44 e 40,53 μg/mL, respectivamente. Na avaliação do LCC e CN contra formas amastigotas intracelulares, houve uma redução significativa no percentual de macrófagos infectados e no índice de sobrevivência das formas amastigotas internalizadas, com índice de seletividade (IS) significativo para ambas as substâncias, apresentando CI50 de 4,63 e 1,42 μg/ml, respectivamente. LCC, AA, CN e CD apresentaram atividade imunomoduladora, atuando sobre parâmetros de ativação de macrófagos, demonstrado pelo aumento de sua capacidade fagocítica e volume lisossomal, contudo não exibiram indução significativa da síntese de NO. Quanto à toxicidade aguda, as taxas de sobrevivência das larvas de T. molitor foram: 85%, 75% e 60% em contato com LCC e 85%, 60% e 40% em contato com CN, ambas as substâncias nas doses de 3; 30 e 300 mg/Kg. Houve diferença significativa entre as curvas de sobrevivência das larvas em contato com CN, demonstrando-se toxicidade aguda significante para esta substância. Os resultados deste estudo são promissores e servem como ponto de partida para a realização de pesquisas posteriores que visem a avaliação do potencial leishmanicida in vivo. ABSTRACT: Leishmaniasis is a neglected endemic disease in 98 countries, constituting a major public health problem due to its high incidence and lethality. It is estimated that between 700,000 to 1 million new cases of cutaneous leishmaniasis and 50,000 to 90,000 new cases of visceral leishmaniasis occur worldwide each year. Its etiological agent is more than 20 species of the genus Leishmania, transmitted by different species of sandflies of the genus Lutzomyia and Phlebotomus. Conventional treatments cause serious adverse effects, low tolerance, development of resistant strains, in addition to being costly. In this context, natural products have been investigated in the search for new therapeutic alternatives. Cashew nut shell liquid (CNSL), one of the main cashew by-products, is a natural source of phenolic compounds such as anacardic acid (AA), cardanol (CN) and cardol (CD), and has antioxidant, anti-inflammatory activities, antimicrobials, antitumors, larvicides and insecticides. Its derivatives are also widely explored in isolation, mainly regarding their properties as antibacterial, antioxidant, antifungal, antitumor, among others. The aim of this study was to evaluate the anti-Leishmania, cytotoxic and immunomodulatory activities of CNSL, AA, CN and CD. For that, protocols of anti-Leishmania activity were carried out on promastigote forms of L. infantum, L. braziliensis and L. major, cytotoxicity on murine macrophages, as well as evaluation of macrophages infected with L. infantum. Immunomodulation assays such as lysosomal activity, phagocytic capacity and evaluation of the induction of nitric oxide production in macrophages, as well as evaluation of acute toxicity on Tenebrio molitor, were also carried out. The tested substances showed anti-Leishmania potential, and the mean inhibitory concentration (IC50) values of CNSL, AA, CN and CD against L. infantum were: 148.12; 106.45; 56.74 and 154.32 μg / mL, against L. braziliensis were: 85.71; 50.83; 64.28 and 137.05 μg / mL, and against L. major were: 153.56; >800; 122.31 and 112.50 μg/ml, respectively. In the action on macrophages, the mean concentrations of cytotoxicity (CC50) of CNSL, AA, CN and CD were 37.51;12.59; 31.44 and 40.53 μg/ml, respectively. In the evaluation of LCC and CN against intracellular amastigotes, there was a significant reduction in the percentage of infected macrophages and in the survival rate of internalized amastigotes, with a significant selectivity index (SI) for both substances, with an IC50 of 4.63 and 1.42 μg/ml, respectively. CNSL, AA, CN and CD showed immunomodulatory activity, acting on macrophage activation parameters, demonstrated by the increase in their phagocytic capacity and lysosomal volume, however they did not exhibit significant induction of NO synthesis. As for acute toxicity, the survival rates of T. molitor larvae were: 85%, 75% and 60% in contact with LCC and 85%, 60% and 40% in contact with CN, both substances at doses of 3; 30 and 300 mg/kg. The results of this study are promising and serve as starting points for further research aimed at evaluating the potential leishmanicidal in vivo.