EFEITO RELAXANTE DA GOMA DO CAJUEIRO (Anacardium Occcidentale L) PURIFICADA E EM SISTEMA DE NANOPARTÍCULAS SOBRE ÚTERO DE RATA.

Abstract

RESUMO:O termo “dismenorreia” é utilizado para denominar as cólicas menstruais dolorosas. O aumento da contratilidade uterina foi proposto como uma das principais causas da dismenorreia primária (DP). Esse estudo propôs o efeito relaxante da goma do cajueiro purificada (GCP) e em sistema de nanopartículas na contratilidade uterina de roedores. A Goma do Cajueiro foi extraída por incisões no tronco da árvore Anacardium Ocidentale e purificada em laboratório. O material foi analisado por Espectroscopia no Infravermelho e Análise Elementar. Para investigação do efeito relaxante em útero isolado de rata (in vitro) foram utilizadas ratas Wistar virgens (Rattus norvegicus). Para o estudo in vivo foram utilizados camundongos fêmeas virgens (Swiss). Todos os animais foram pré-tratados com estradiol antes dos experimentos. As contrações uterinas em órgão isolado foram monitoradas por um transdutor de deslocamento de força conectado a um amplificador de sinal. Os estudos foram realizados em útero pré-contraído com ocitocina (10-2 UI/mL) ou KCl (60 mM) em diferentes concentrações da GCP (10-3–103μg/mL). Foi investigado o efeito da GCP sob uma curva concentração-resposta à ocitocina. O mecanismo de ação foi estudado através da participação dos canais de potássio na presença de tetraetilamônio (TEA+) 1mM e 5 mM. O teste de contorção induzida por ocitocina foi utilizado como modelo de DP in vivo. A GCP foi ainda modificada por acetilação para síntese de nanopartículas. Esta foi realizada utilizando o método de diálise ou deslocamento do solvente e analisadas em DLS, Potencial Zeta e índice de polidispersão (IPD). A estabilidade coloidal das nanopartículas foi monitorada por 12 meses. O tecido uterino foi coletado para exame histológico (H & E). A CGP reduz a contração uterina induzida pela ocitocina in vitro de forma significativa e dependente da concentração (CE50 = 2,53 ± 0,54 μg/mL) com eficácia máxima (Emax) de 97,8 ± 0,8%. A característica do antagonismo da contração é do tipo não competitivo. Na presença de 1mM e 5 mM de TEA+ o valor de Emax foi inferior a 50%, o que sugere o envolvimento dos canais de K+. O estudo in vivo demonstrou que a GCP reduziu significativamente o número de contorções induzidas por ocitocina com uma inibição máxima 78,86 ± 8,97% na dose de 0,3 mg/kg. Cortes histológicos confirmaram o efeito tocolítico da GCP. O espectro do infra vermelho e análise elementar atestaram a originalidade da GC e comprovam a hidrofobização por acetilação. As NPsGCA foram sintetizas com partículas de distribuição unimodal (tamanho: 257,63±1,60 nm; potencial zeta: -32,18±0,70 mV; IPD: 0,140±0,012). A estabilidade coloidal das nanopartículas monitorada por 12 meses foi confirmada, o que determina um parâmetro importante para interação e penetração de barreiras biológicas. As NPsGCA inibiram 88,66% as contorções induzidas por ocitocina na concentração de 0,03 mg/kg. Os cortes histológicos confirmaram o efeito tocolítico. O presente estudo demonstrou a existência de um efeito terapêutico inovador da GCP e o aprimoramento do mesmo em sistema de nanopartículas, ao comprovar sua capacidade de diminuir a contração do músculo liso uterino induzida por ocitocina in vitro e in vivo. O mecanismo do efeito tocolítico foi estudado e sugere estar associado à ativação de canais de K+. Isso amplia as possibilidades da Goma do Cajueiro ser mais investigada para o tratamento da DP.

ABSTRACT:The term "dysmenorrhea" is used to describe painful menstrual cramps. The increase in uterine contractility was proposed as one of the main causes of primary dysmenorrhoea (PD). This study proposed the relaxing effect of purified cashew gum (PCG) and nanoparticle system on rodent uterine contractility. Cashew gum was extracted by incisions in the trunk of the Anacardium occcidentale L tree and purified in the laboratory. The originality of the material was proven by Infrared Spectroscopy and Elementary Analysis. To investigate the relaxing effect in rat isolated uterus (in vitro) virgin Wistar rats (Rattus norvegicus) were used. For the in vivo study, virgin female mice (Swiss) were used. All animals were pretreated with estradiol prior to the experiments. Uterine contractions were monitored by a force-displacement transducer connected to a signal amplifier. The studies were performed in uterus pre-contracted with oxytocin (10-2 UI/mL) or KCl (60mM) at different concentrations of PCG (10-3–103μg/mL). The effect of PCG on a concentration-response curve to oxytocin was investigated. The mechanism of action was studied through the participation of potassium channels in the presence of TEA+ 1 mM and 5 mM. The oxytocin-induced contortion test was used as a model for in-vivo dysmenorrhea. PCG was further modified by acetylation to synthesize nanoparticles. This was done using the dialysis method or solvent displacement and analyzed in DLS, Zeta Potential and polydispersity index (PDI). The colloidal stability of the nanoparticles was monitored for 12 months. The rats received the Nanoparticles of Acetylated Cashew Gum (NPsACG) by gavage. The uterine tissue was collected for histopathological examination (H & E). PCG relaxed the uterus when it was precontracted with 10-2 IU / mL oxytocin significantly and concentration-dependent (EC50 = 2.53 ± 0.54 μg / mL) with maximum efficacy of 97.8 ± 0.8%. The displacement of the curve to the right is observed, in a non-parallel manner with reduction of Emax in relation to the concentration, which characterizes a non-competitive antagonism and confirms that the PCG does not act at receptor levels. In the presence of the blocker (TEA+) the value of Emax was only 49.05 ± 4.33% for 5mM and 58.87% ± 3% for 1mM, which made it impossible to calculate the EC50. Thus suggesting the participation of K + channels. Oral PCG significantly reduced the number of oxytocin-induced contortions compared to the negative control group, maximum inhibition percentage of 78.86 ± 8.97% at the dose of 0.3 mg / kg. Histological sections confirmed the tocolytic effect of PCG. Infrared spectrum and elemental analysis attest to the originality of GC and prove the hydrophobization by acetylation. The NPsACG were synthesized with unimodal distribution particles (size: 257.63 ± 1.60 nm, zeta potential: -32.18 ± 0.70 mV, PDI: 0.140 ± 0.012). The colloidal stability of nanoparticles monitored for 12 months was confirmed, which determines an important parameter for interaction and penetration of biological barriers. NPsACG inhibited the oxytocin-induced contortions at the concentration of 0.03 mg / kg (88.66%). Histological sections confirmed the tocolytic effect. The present study demonstrated the existence of an innovative PCG effect and the improvement of the same in a nanoparticle system in demonstrating its ability to decrease oxytocin-induced contraction of uterine smooth muscle in vitro and in vivo. The mechanism of tocolysis suggests this is associated with the activation of K+ channels. This increases the possibilities of PCG to be investigated for the treatment of PD.