PERFIL QUÍMICO E POTENCIAL BIOLÓGICO DO ÓLEO ESSENCIAL E EXTRATO ETANÓLICO DAS FOLHAS DA ESPÉCIE ANNONA SQUAMOSA L. (ATA)

Abstract

RESUMO O Aedes aegypti é um mosquito vetor que transmite várias doenças como a dengue, chikungunha, zika e febre amarela. Substâncias advindas de plantas têm sido alvo de estudos por apresentarem um baixo efeito sobre os organismos e, portanto, uma alternativa ao controle do A. aegypti. Dessa forma, foi avaliado o perfil químico do óleo essencial (OEAS) e extrato etanólico das folhas da espécie Annona squamosa L. (Annonaceae) (EEAS), e verificado a toxicidade frente as larvas do Aedes aegypti e microcrustácios de Artemia salina L, e inibição da enzima acetilcolinesterase in vitro, como forma de determinar um dos mecanismos de ação das amostras. Para os ensaios de toxicidade utilizou-se o óleo e o extrato em diferentes concentrações em larvas de A. aegypti do 3º e 4º estádios e microcrustácios de A. salina L. O OEAS foi extraído através do processo de hidrodestilação tipo Clevenger e os constituintes foram analisados por CG-EM. A análise por CG-EM, permitiu identificar os constituintes majoritários a saber: trans-cariofileno (25,53%), germacreno D (22,70%) e o γ-elemeno (14,86%). O screening fitoquímico do EEAS revelou a presença de alcaloides, taninos condensados, triterpenos, flavonoides e saponinas. A quantificação dos metabólitos secundários do EEAS foi realizada por métodos espectrofotométricos, obtida através de curvas de calibração de padrões (20-200 µg mL-1) que apresentaram boa linearidade. O EEAS apresentou 55,33 ± 2,55 mg g-1 de teor de fenóis, 58,73 ± 6,41 mg g-1 de taninos condensados e 0,068 ± 0,00 mg g-1 de alcaloides, e alto teores de flavonoides (367,69 ± 3,97 mg g-) e taninos hidrolisáveis (243,90 ± 1,43 mg g-). A CL50 do A. aegypti para OEAS foi igual a 76 ppm e para o EEAS não foi possível calcular a CL50 pois não houve a mortalidade em 50% das larvas após 48 horas de exposição. No efeito residual o OEAS continuou matando as larvas após 48 horas, no entanto em menor proporção, sugerindo-se que as larvas possam estar consumindo o óleo. Para o extrato não foi possível determinar o efeito residual, visto que não teve mortalidade efetiva. O OEAS e EEAS foram altamente tóxicos para as A. salina L. onde a CL50 de OEAS foi igual a 1,12 ppm e para o EEAS houve 100% de mortalidade em todas as concentrações e não foi possível calcular a CL50. Portanto, o ensaio de toxicidade do EEAS para as larvas do A. aegypti não mostrou correlação com a toxicidade das A. salina L. No ensaio de inibição da enzima acetilcolinesterase, o OEAS e EEAS de A. squamosa L. não apresentaram inibição da enzima. A partir deste estudo é possível sugerir que a morte das larvas no OEAS não esteja correlacionada com o mecanismo de inibição da enzima AChE no sistema nervoso central. Esses resultados mostram um potencial larvicida do OEAS, porém o efeito larvicida pronunciado não está relacionado ao mecanismo de inibição da enzima AChE. Estes resultados nos motivam a continuação deste trabalho para avaliar qual composto apresenta a ação larvicida, e o seu efeito antiproliferativo do OEAS visando uma formulação farmacêutica.ABSTRACT Aedes aegypti is a vector mosquito that transmits various diseases such as dengue, chikungunha, zika and yellow fever. Substances from plants have been studied because they have a low effect on organisms and, therefore, an alternative to the control of A. aegypti. Thus, the chemical profile of the essential oil (OEAS) and ethanolic extract of the leaves of Annona squamosa L. (Annonaceae) (EEAS) were evaluated, and the toxicity of Aedes aegypti larvae and Artemia salina L. microcrustacies and enzyme inhibition were verified. acetylcholinesterase in vitro as a way to determine one of the mechanisms of action of the samples. For toxicity tests, oil and extract were used at different concentrations in A. aegypti larvae of 3rd and 4th stages and A. salina L. microcrustacies. The OEAS was extracted through Clevenger hydrodistillation process and the constituents were analyzed by GC-MS. GC-MS analysis identified the major constituents: trans-caryophyllene (25.53%), germacrene D (22.70%) and γ-elemene (14.86%). The phytochemical screening of the EEAS revealed the presence of alkaloids, condensed tannins, triterpenes, flavonoids and saponins. The quantification of EEAS secondary metabolites was performed by spectrophotometric methods, obtained through standard calibration curves (20-200 µg mL-1) that presented good linearity. The EEAS presented 55.33 ± 2.55 mg g-1 of phenol content, 58.73 ± 6.41 mg g-1 of condensed tannins and 0.068 ± 0.00 mg g-1 of alkaloids, and high levels of flavonoids (367.69 ± 3.97 mg g-1) and hydrolyzable tannins (243.90 ± 1.43 mg g-1). The IC50 of A. aegypti for OEAS was 76 ppm and for the EEAS it was not possible to calculate the LC50 because there were not mortality in 50% of the larvae after 48 hours of exposure. In the residual effect, OEAS continued to kill the larvae after 48 hours, but to a lesser extent, suggesting that the larvae may be consuming the oil. For the extract it was not possible to determine the residual effect, since it had no effective mortality. OEAS and EEAS were highly toxic for A. salina L. where the OEAS LC50 was 1.12 ppm and for EEAS there was 100% mortality at all concentrations and it was not possible to calculate the LC50. Therefore, the EEAS toxicity test for A. aegypti larvae showed no correlation with A. salina L. toxicity. In the acetylcholinesterase inhibition assay, A. squamosa L. OEAS and EEAS showed no inhibition of the enzyme. From this study it is possible to suggest that the death of larvae in OEAS is not correlated with the mechanism of AChE enzyme inhibition in the central nervous system. These results show a larvicidal potential of the OEAS, but the pronounced larvicidal effect is not related to the AChE enzyme inhibition mechanism. These results motivate us to continue this work to evaluate which compound has larvicidal action, and its antiproliferative effect of OEAS aiming at a pharmaceutical formulation.