ISOLAMENTO E CARACTERIZAÇÃO DE CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS OBTIDAS A PARTIR DA POLPA DENTÁRIA IMATURA DE CÃES

Abstract

RESUMO: Estudos com células-tronco de tecidos adultos representam uma relevante alternativa para a identificação de nichos celulares de elevada plasticidade e coleta inócua ao paciente. A polpa de dente representa um nicho de células-tronco mesenquimais (CTM), cujas características de plasticidade não estão totalmente definidas, mas que apresentam um promissor potencial de diferenciação. Acredita-se que a polpa de dente decíduo possa apresentar características de plasticidade similares à de outras CTM, fato que suscita a necessidade de investigação científica. Dessa forma, esta pesquisa teve por objetivo adequar protocolos para isolamento, expansão e caracterização imunofenotípica por citometria de fluxo das CTM de polpa dentária imatura de cães (CTPD-ic). Para tanto, foram utilizados três dentes decíduos, dos quais foram obtidas as polpas dentárias. O tecido foi dissociado mecanicamente e as células obtidas, cultivadas e expandidas em meio DMEM-F12 suplementado até a obtenção de uma monocamada celular aderente, homogênea e de morfologia fusiforme. Realizaram-se ensaios de unidades formadoras de colônias (UFC) e cinética celular por curva de crescimento por saturação. Induziu-se diferenciação das células em três linhagens distintas e caracterizou- se as células por citometria de fluxo. O ensaio de UFC permitiu identificar 38 colônias homogêneas e o estudo de cinética celular demonstrou intensa proliferação celular. As células induzidas in vitro às diferenciações osteogênicas, adipogênicas e condrogênicas, evidenciaram satisfatoriamente osteoblastos, adipócitos e condrócitos, respectivamente. Na citometria de fluxo, as células aderentes apresentaram expressão do marcador CD105 e ausência de marcação em CD14 e CD45. Desta forma, pôde-se constatar que as células oriundas da polpa de dente imatura canina constituem-se de uma população bem definida de CTM, com características semelhantes às encontradas em outros nichos anatômicos, em diferentes espécies. O tecido dentário decíduo é de fácil obtenção, inócuo e indolor, dispensando o uso de procedimentos anestésicos ou cirúrgicos. As CTMPD-ic representam uma importante alternativa para manutenção de um banco de células-tronco mesenquimais caninas e, por seguinte, poderão colaborar com futuros estudos pré-clínicos. ABSTRACT: Researches on stem cells from adult tissues provide a relevant alternative to the identification of niches of niches with high plasticity and harmless collection to the pacient. The dental pulp constitutes a niche of mesenchymal stem cells (MSCs), whose have a promising differentiation potential. It is believed that the pulp of a deciduous tooth can present similar plasticity characteristics to other MSCs, which makes room to the need of scientific investigation. Therefore, this study aimed to adapt protocols for isolation, expansion and immunophenotypic characterization by flow cytometry of MSC of canine immature dental pulp (MSCDP-ci). For this purpose, three deciduous teeth were used from which dental pulp was obtained. The tissue was mechanically dissociated then resulting cells were cultivated and expanded in culture medium DMEM-F12 supplemented until obtaining an adherent cell monolayer, homogeneous and fusiform morphology. They were held colony forming unit (CFU) essay and cell kinetics with growth curve for saturation. It was induce differentiation of the cells into three distinct lineages and was characterized the cells by flow cytometry. The CFU essay identified 38 colonies homogeneous and cell kinetics study It showed intense cell proliferation. The induced cells, in vitro, to the osteogenic, adipogenic and chondrogenic differentiation, demonstrated satisfactorily, osteoblasts, adipocytes and chondrocytes, respectively. In flow cytometry, the adherent cells exhibited the expression of marker CD105 and absence of expression of CD14 and CD45. Thus, It could be seen that the cells derived from canine immature dental pulp constitute a well-defined population of MSC, with similar characteristics to those found in other anatomical niches in different species. The deciduous tooth tissue is easily obtainable, harmless and painless, eliminating the use of anesthetic or surgical procedures. The MSCDP-ci represents an important alternative to maintaining a database of canine mesenchymal stem cells and, following, can cooperate with future pre-clinical studies.