AVALIAÇÃO DO DESENVOLVIMENTO DE FOLÍCULOS PRÉ-ANTRAIS CAPRINOS IN SITU CO-CULTIVADOS COM CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS DA MEDULA ÓSSEA.

Abstract

RESUMO: As biotécnicas da reprodução animal constituem ferramentas importantes para o desenvolvimento e avanço tecnológico, possibilitando a expansão e seleção de material genético de qualidade. Dentre as biotécnicas mais recentes, que visam otimizar o potencial reprodutivo de fêmeas, destaca-se a Manipulação de Oócitos Inclusos em Folículos Ovarianos Pré-antrais (MOIFOPA). O co-cultivo utilizando FOPA e células de outras linhagens, como as células-tronco mesenquimais (CTM) tem se tornado uma alternativa vantajosa dentro da técnica de MOIFOPA. Este estudo tem como objetivo desenvolver um sistema de co-cultivo in vitro de FOPA caprinos in situ com Células-Tronco Mesenquimais da medula óssea (CTMMO), avaliando a influência dessas células no crescimento folicular, taxa de ativação e sobrevivência de folículos morfologicamente normais. As CTMMO foram isoladas e co-cutlivadas com fragmentos do córtex ovariano onde estão inclusos os FOPA’s por um e sete dias, com meio de cultivo básico. Cortes histológicos dos fragmentos foram analisados e obtidos dados referentes à classificação morfológica, taxa de sobrevivência de folículos morfologicamente normais e taxa de ativação folicular. Os meios de cultivo no dia um e sete também foram colhidos para dosagem de nitrito e glutationa reduzida. Verificou-se redução significativa (P<0,05) do percentual de folículos morfologicamente normais em comparação ao controle fresco apenas no sétimo dia de cultivo no tratamento sem CTMMO (SC), no tratamento com CTM (CC) não foi observada redução significativa (P>0,05). Ao comparar os tratamentos CC vs. SC, no sétimo dia de cultivo foi evidenciada taxa significativamente superior de FOPA morfologicamente normais no CC (P>0,05). Em ambos os tratamentos foi constatada taxas de folículos primordiais e em desenvolvimento similar ao controle fresco (P>0,05). Ao comparar os tratamentos entre si, bem como com o controle fresco não foi observada diferenças significativas no diâmetro folicular (P>0,05), tampouco na concentração de nitrito (P>0,05). A concentração de glutationa reduzida foi significativamente inferior no sétimo dia do co-cultivo. Concluindo, o co-cultivo não exerceu influência sobre o desenvolvimento folicular e oocitário. Entretanto, foi fundamental para manter a sobrevivência de folículos pré-antrais caprinos durante sete dias de cultivo. Além disso, ficou demonstrado que é possível o cultivo de FOPA’s simultaneamente CTMMO. ---------------- ABSTRACT: The biotechniques of animal reproduction are important tools for the development and technological advancement, allowing the expansion and selection of quality genetic material. Among the most recent biotechniques that aim to optimize the reproductive potential of females, we highlight the Manipulation of Oocytes Included in Pre-antral Ovarian Follicles (MOIFOPA). This study aims to develop an in vitro co-culture system of goat FOPA with bone marrow Mesenchymal Stem Cells (MSC), evaluating the influence of these cells on follicular growth, rate of activation and survival of morphologically normal follicles. MSC’s were isolated and co-cutlivated with fragments of the ovarian cortex where FOPA's are included for one and seven days, with basic culture medium. The histological sections of the fragments were analyzed, and data regarding the morphological classification, morphologically normal follicle survival rate and follicular activation rate were obtained. Culture medium on day one and seven were also harvested for nitrite dosage and reduced glutathione. There was a significant reduction (P <0.05) in the percentage of morphologically normal follicles compared to fresh control only after seven days of culture in the SC treatment, in the CC treatment no significant reduction was observed (P> 0.05). When comparing treatments CC vs. SC on day one and seven of cultivation did not show significant differences (P> 0.05). In both treatments primordial and developing follicle rates similar to the fresh control (P> 0.05) were observed. When comparing treatments with each other, as well as with fresh control, no significant differences were observed in follicular diameter (P> 0.05) or nitrite concentration (P> 0.05). The concentration of reduced glutathione was significantly lower on the seventh day of co-cultivation. In conclusion, co-cultivation had no influence on follicular and oocyte development. However, it was critical to maintain the survival of preantral follicles for 7 days of culture. In addition, it has been demonstrated that it is possible to culture FOPA's simultaneously with CTMMO.