Mestrado em Ciências Biomédicas

POLIMORFISMOS NOS GENES HTR1A E HTR2A INFLUENCIAM O RECRUTAMENTO DE MEMÓRIA DE TRABALHO VISUOESPACIAL NO CÓRTEX FRONTOPARIENTAL

Wed, 26 Oct 2022 00:00:00 GMT

POLIMORFISMOS NOS GENES HTR1A E HTR2A INFLUENCIAM O RECRUTAMENTO DE MEMÓRIA DE TRABALHO VISUOESPACIAL NO CÓRTEX FRONTOPARIENTAL SOUSA, Vanessa Galeno de RESUMO: A memória de trabalho é definida como um sistema que proporciona um armazenamento e manipulação temporária da informação a fim de executar tarefas cognitivas. O desempenho de tarefas que a envolvem tem sido associado com padrões neurofisiológicos do córtex pré-frontal e córtex pariental, os quais são mensurados por eletroencefalograma. Os polimorfismos HTR1A -1019C/G, HTR2A T102C e HTR2A A-1438G têm sido associados à disponibilidade de receptores serotoninérgicos, bem como no entendimento da memória espacial do indivíduo e da dinâmica molecular envolvida na memória de trabalho. Este estudo teve como objetivo analisar a influência dos polimorfismos nos genes HTR1A e HTR2A associado ao desempenho e diferenças interindividuais durante a tarefa de memória de trabalho visuoespacial, além das modulações da frequência da banda teta. Foram recrutados 178 voluntários do sexo masculino, com idade entre 18 e 32 anos, sendo a média de idade de 22,77 (± 2,97) anos, que não tivessem utilizado drogas psicotrópicas e sem histórico de doenças neurológicas. A análise das frequências genotípicas e alélicas dos polimorfismos mostrou que a população estudada está em equilíbrio de Hardy-Weinberg (p > 0,05). A frequência alélica observada foi de C = 48,5% e G = 51,4% para HTR1A -1019C/G, T = 40,7% e C = 59,2% para HTR2A T102C, A = 40,4% e G = 59,5% para HTR2A A-1438G. Ao analisar a variável comportamental por meio de uma two-way mixed factorial ANOVA em relação à tarefa realizada, com base nos fatores: genótipos e fator eixo (plano horizontal: X e plano vertical: Y), verificou-se que os resultados apresentaram efeito principal para eixo para os três polimorfismos analisados (p<0,0001), independente das combinações genotípicas e dos agrupamentos inter e intragênicos. Portanto, não se pode afirmar que os genótipos não interferem na realização da tarefa, mas que a aleatoriedade dos planos de ativação do estímulo de mira ao alvo, horizontal e vertical, influenciem no desempenho da tarefa, considerando sua nateureza rápida e individual. O resultado da regressão logística binária com base na expressão da serotonina: agrupamento de baixa expressão de serotonina vs. expressão normal de serotonina também não indicou associação estatisticamente significativa para os eixos relacionados a tarefa para nenhum dos polimorfismos (p>0,05). Já os resultados observados nas análises neurofisiológicas pelo teste three-way mixed factorial ANOVA para a banda teta, demonstraram significânica dos genótipos com o alelo mutante, hetero e homozigoto, nos três polimorfismos estudados, com as subáreas do córtex pré-frontal e córtex pariental, indicando um maior recrutamento neural dessas regiões para realização da tarefa. Conclui-se que, os achados deste estudo nos permitem constatar que os polimorfismos estudados parecem não interferir diretamente na análise comportamental, sugerindo que não estejam relacionados com tarefas rápidas, mas de natureza na qual a memorização de múltiplos itens. Já em uma perspectiva neurofisiológica, os alelos HTR1A -1019G, HTR2A 102C e HTR2A -1438G podem modular a atividade de memória de trabalho na rede frontoparietal, exigindo uma maior ativação dessa área para realização de exercícios espaciais. ABSTRACT: Working memory is defined as a system that provides temporary storage and manipulation of information in order to perform cognitive tasks. The performance of tasks that involve it has been associated with neurophysiological patterns in the prefrontal and pariental cortex, which are measured by electroencephalogram. The polymorphisms HTR1A -1019C/G, HTR2A T102C and HTR2A A-1438G have been associated with the availability of serotonin receptors, as well as with the understanding of the individual's spatial memory and the molecular dynamics involved in working memory. This study aimed to analyze the influence of polymorphisms in the HTR1A and HTR2A genes associated with performance and inter-individual differences during the visuospatial working memory task, in addition to theta band frequency modulations. A total of 178 male volunteers, aged between 18 and 32 years, with a mean age of 22.77 (± 2.97) years, who had not used psychotropic drugs and had no history of neurological diseases, were recruited. The analysis of the genotypic and allelic frequencies of the polymorphisms showed that the studied population is in Hardy-Weinberg equilibrium (p > 0.05). The allelic frequency observed was C = 48.5% and G = 51.4% for HTR1A -1019C/G, T = 40.7% and C = 59.2% for HTR2A T102C, A = 40.4% and G = 59.5% for HTR2A A-1438G. When analyzing the behavioral variable by ANOVA mixed factorial in relation to the task performed, based on the factors: genotypes and axis factor (horizontal plane: X and vertical plane: Y), it was found that the results showed a main effect for the axis for the three polymorphisms analyzed (p <0.0001), regardless of genotypic combinations and inter- and intragenic groupings. Therefore, it cannot be said that the genotypes do not interfere with the task performance, but that the randomness of the targeting stimulus activation plans, horizontal and vertical, influence the task performance, considering its rapid and individual nature. The result of binary logistic regression based on 5-HT expression: 5-HT low expression cluster vs. Normal 5-HT expression also did not indicate a statistically significant association for the task-related axes for any of the polymorphisms (p>0.05). The results observed in the neurophysiological analyzes by the three-way mixed factorial ANOVA test for the theta band, showed the significance of the genotypes with the mutant, hetero and homozygous allele, in the three studied polymorphisms, with the subareas of the prefrontal cortex and the pariental cortex, indicating greater neural recruitment of these regions to perform the task. It is concluded that the findings of this study allow us to verify that the studied polymorphisms do not seem to interfere directly in the behavioral analysis, suggesting that they are not related to fast tasks, but of a nature in which the memorization of multiple items. From a neurophysiological perspective, the alleles HTR1A -1019G, HTR2A 102C and HTR2A -1438G can modulate WM activity in the frontoparietal network, requiring greater activation of this area to perform spatial exercises. Orientadora: Profª. Drª. France Keiko Nascimento Yoshioka Examinador interno: Prof. Dr. Silmar Silva Teixeira Examinador interno: Prof. Dr. Giovanny Rebouças Pinto

SUSCEPTIBILIDADE in vitro DE AGENTES DA CROMOBLASTOMICOSE À SINVASTATINA E À PRAVASTATINA ISOLADAS E EM COMBINAÇÃO COM ANTIFÚNGICOS

Thu, 08 Sep 2022 00:00:00 GMT

SUSCEPTIBILIDADE in vitro DE AGENTES DA CROMOBLASTOMICOSE À SINVASTATINA E À PRAVASTATINA ISOLADAS E EM COMBINAÇÃO COM ANTIFÚNGICOS MENDES, Maria Gabriela Araújo RESUMO: A cromoblastomicose é uma infecção subcutânea, granulomatosa e crônica causada pela inoculação traumática de fungos da família Herpotrichiellaceae. A terapia para essa micose é limitada. Nesse sentido, o reposicionamento de fármacos presentes no mercado pode ser uma alternativa. As estatinas são uma classe de moléculas que atuam na redução dos níveis séricos de colesterol por meio da inibição da enzima 3-hidroxi-3-metilglutaril-CoA redutase, a qual está envolvida na biossíntese de esteróis, tais como colesterol e o ergosterol. Este último é considerado um dos principais componentes da membrana celular fúngica. Tendo em vista o mecanismo de ação das estatinas, espera-se que esses fármacos possuam atividade antifúngica. Desse modo, o presente estudo objetivou avaliar a atividade antifúngica in vitro da sinvastatina e da pravastatina isoladas e em combinação com quatro antifúngicos (itraconazol, posaconazol, terbinafina e anfotericina B) frente a agentes da cromoblastomicose. O ensaio de susceptibilidade fúngica foi realizado de acordo com o documento M38-A2 do Clinical and Laboratory Standards Institute. O perfil de interação entre as estatinas e os antifúngicos foi avaliado pelo método de tabuleiro de xadrez. A interação existente entre os fármacos foi obtida pelo cálculo do Índice Fracionário de Concentração Inibitória (IFCI). Para análise das alterações morfológicas de Fonsecaea pedrosoi ATCC 46428, causadas pela combinação que apresentou menores valores de IFCI, foram obtidas imagens por microscopia de força atômica. A sinvastatina e a pravastatina não inibiram os fungos (n=19) nas faixas de concentrações testadas (CIM > 256 μg/mL). No entanto, as combinações de itraconazol/sinvastatina e de posaconazol/sinvastatina foram sinérgicas contra os isolados investigados (IFCI = 0,24 – 0,5). Quanto à pravastatina, o melhor resultado foi alcançado ao combiná-la com o posaconazol, em que houve sinergismo para oito dos 19 isolados. As demais combinações foram sinérgicas para apenas algumas amostras fúngicas. Não houve antagonismo dentre as associações avaliadas para ambas as estatinas. Ao analisar as imagens microscópicas da associação de itraconazol/sinvastatina, foi possível observar a ruptura da membrana da célula fúngica e o extravasamento do conteúdo intracelular, quando comparada aos controles. Com base nos resultados, pode-se constatar que a pravastatina em conjunto com os antifúngicos apresentou resultados variáveis contra os isolados testados. Porém, a sinvastatina em combinação com os triazólicos apresentou um perfil sinérgico, sendo estas associações promissoras no tratamento da cromoblastomicose ABSTRACT: Chromoblastomycosis is a subcutaneous, granulomatous and chronic infection caused by a traumatic implantation of fungi of the family Herpotrichiellaceae. There is no therapy of choice for this mycosis. Thus, the relocation of the commercially available drugs may be an alternative. Statins are a class of molecules that reduces the serum cholesterol levels by inhibiting the enzyme 3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase, which is involved in the biosynthesis of sterols, such as cholesterol an ergosterol. The latter is considered one of the main components of fungal cell membrane. Considering the mechanism of action of statins, it is expected that these drugs have antifungal activity. Thus, this work aimed to evaluate the in vitro susceptibility of chromoblastomycosis agents to simvastatin and pravastatin alone and in combination with four antifungals (itraconazole, posaconazole, terbinafine e amphotericin B). The susceptibility assesment was carried out according to Clinical and Laboratory Standards Institute-protocol M38-A2. The interaction between simvastatin and the antifungal agents was evaluated through chessboard technique. This interaction was determined by calculating the Fractional Inhibitory Concentration Index (FICI). For the analysis of morphological changes against Fonseacaea pedrosoi ATCC 46428, caused by the combination that presented lower FICI values, images were obtained by atomic force microscopy Simvastatin and pravastatin could not inhibit anyone of the strains (n=19), even when the higher concentration was tested (MIC > 256 μg/mL). However, the combinations itraconazole-simvastatin and posaconazole-simvastatin demonstrate synergism against all of the investigated isolates (FICI = 0.24 – 0.5). Regarding pravastatin, the best result was achieved by combining it wwith posaconazole, in which there was synergism for eight of the nineteen isolates. The other combinations were synergics for only some of the fungal isolates. Antagonism was not observed. By analyzing the microscopic images of the itraconazole/simvastatin association, it was possible to observe the rupture of the fungal cell membrane and extravasation of the intracellular fluido, when compared to the controls. In accordance with the results, it can be observed that pravastatin combined with antifungals showed variable results against the isolates tested. Therefore, simvastin in combination with triazole antifungals presented a synergistic profile, being these associations promising in the treatment of chromoblastomycosis. Orientadora: Profa. Dra. Tatiane Caroline Daboit Examinadora interna: Profa. Dra. Anna Carolina Toledo da Cunha Pereira Examinadora interna: Profa. Dra. Franciele Basso Fernandes Silva

PREVALÊNCIA DE POLIMORFISMOS GENÉTICOS ASSOCIADOS À RESPOSTA TERAPÊUTICA AO CLOPIDOGREL EM UMA POPULAÇÃO DO ESTADO DO PIAUÍ

Thu, 08 Sep 2022 00:00:00 GMT

PREVALÊNCIA DE POLIMORFISMOS GENÉTICOS ASSOCIADOS À RESPOSTA TERAPÊUTICA AO CLOPIDOGREL EM UMA POPULAÇÃO DO ESTADO DO PIAUÍ LOPES, Cláudia Lorena Ribeiro RESUMO: O clopidogrel é um antiagregante plaquetário muito utilizado no tratamento de doenças cardiovasculares; no entanto, seu uso pode ocasionar efeitos adversos, devido à variabilidade genética individual. Essa variabilidade pode ser explicada por polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs, do inglês single nucleotide polymorphisms) no gene CYP2C19, responsável pela metabolização do clopidogrel, dentre os quais destacam-se o CYP2C19*2 e CYP2C19*17 por resultarem, respectivamente, perda e ganho de função da proteína correspondente. A fim de se evitar o surgimento de efeitos adversos ao uso do clopidogrel, inúmeros estudos têm sido realizados, em diferentes populações mundiais, com a finalidade de se investigar nos pacientes os genótipos dos SNPs CYP2C19*2 e CYP2C19*17, antes da prescrição terapêutica. No entanto, ao nosso conhecimento, não existem estudos que relatem a frequência desses loci de interesse farmacogenético na população piauiense. Por esse motivo, este estudo tem como objetivo principal descrever as frequências alélicas, genotípicas e haplotípicas dos SNPs CYP2C19*2 e CYP2C19*17, bem como apresentar a distribuição dos diferentes fenótipos relacionados, em uma amostra miscigenada do Estado do Piauí. O presente estudo foi realizado a partir de DNA de 204 amostras de indivíduos nascidos em duas gerações passadas dentro do território piauiense. Foi realizada extração, quantificação e genotipagem das amostras de DNA, sendo esta última etapa realizada a partir de PCR em tempo real, consistindo em 2,5 µL de Master Mix, 0,25 µL de Sonda/Primers e 2,25 µL de DNA, totalizando 5 µL por poço. Em todas as análises do estudo foi utilizado o nível de significância p < 0,05. Todas as frequências genotípicas apresentaram-se dentro do equilíbrio de Hardy-Weinberg (p > 0,05). Foi encontrada uma frequência de 9,6% para o CYP2C19*2 e de 22% para o CYP2C19*17. O haplótipo mais prevalente foi o *1*1, com 68,3%, seguido do *1*17 com 22,1% e *1*2 com 9,6%, o que indica que a maior parte da população apresenta alelos funcionais para o CYP2C19. As frequências alélicas do presente estudo foram comparadas com frequências alélicas de diferentes populações mundiais e foi percebido que em relação ao CYP2C19*2 não foram encontradas diferenças estatisticamente significativas em regiões brasileiras (p > 0,05), mas em regiões da Ásia e da África essas diferenças foram percebidas (p < 0,05). O CYP2C19*17 apresentou diferenças significativas com uma população ameríndia brasileira, e com populações latino-americanas, asiáticas e europeias (p < 0,05). Os fenótipos mais frequentes foram o metabolizador normal com 46,1% e o metabolizador rápido com 31,9%, mostrando que o genótipo de um paciente pode interferir na metabolização de um medicamento. Não foi encontrada correlação entre ancestralidade e número de cópias do *2 e *17 (p > 0,05). Os resultados desse estudo podem guiar políticas públicas de prevenção dos efeitos adversos do uso do clopidogrel na população piauiense. ABSTRACT: Clopidogrel is a widely used antiplatelet agent in the treatment of cardiovascular disease; however, its usage can cause adverse effects, due to individual genetic variety. This variety can be explained as SNPs - single nucleotide polymorphisms - in CYP2C19 Gene, responsible for metabolizing clopidogrel, among them, CYP2C19*2 and CYP2C19*17 stood out because they result in, respectively, gain and loss of the corresponding protein function. In order to avoid adverse effects after clopidogrel usage, numerous studies have been carried out in different world populations intended to investigate in patients the SNPs CYP2C19*2 and CYP2C19*17 genotypes, before therapeutic prescription. Nevertheless, as far as it is known, there are no studies that report the frequency of these loci of pharmacogenetic interest in Piauí's population. Thus, the main goal in this study is to describe allelic, genotypical and haplotypical frequencies of CYP2C19*2 and CYP2C19*17 SNPs; furthermore, present the different related phenotypes distribution in a mixed sample collected in Piauí State. The present study was carried out from DNA from 204 samples of individuals born in two past generations within the Piaui territory. DNA samples were extracted, quantified and genotyped. The last step was performed from real-time PCR, consisting of 2.5 µL Master Mix, 0.25 µL Probe / Primers and 2.25 µL DNA. , totaling 5 µL per well. In all analyzes of the study, the significance level p <0.05 was used. All genotypical frequencies presented remained balanced according to Hardy-Weinberg equilibrium (p > 0.05). The frequency 9.6% in CYP2C19*2 and 22% in CYP2C19*17 was found. The most prevalent haplotype was the *1*1, with 68.3%, followed by *1*17 with 22.1% and *1*2 with 9.6%, which indicate that the most part of the population presents functional alleles for CYP2C19. The allelic frequencies in this study were compared to allelic frequencies of other world populations and it was noticed that regarding CYP2C19*2, significant statistic differences in Brazilian regions were not found (p > 0.05), but in Asia and Africa, these differences were noticed (p < 0.05). CYP2C19*17 presented significant differences in Brazilian amerindian population, and in Latin American, Asian and European populations (p < 0.05). The most frequent phenotypes were the normal metabolizer with 46.1%, and the fast metabolizer with 31.9%, showing that a patient's genotype can interfere in medicine metabolization. Correlation between ancestry and the number of copies of *2 and *17 (p > 0.05) was not found. The results within the study can guide public policies in favor of adverse effects prevention after clopidogrel usage in Piauí's population. Orientador: Prof. Dr. Giovanny Rebouças Pinto Examinadora interna: Profa. Dra. France Keiko Nascimento Yoshioka Examinador interno: Prof. Dr. Hygor Ferreira Fernandes

A DOENÇA DO MOVIMENTO VISUALMENTE INDUZIDA OCASIONADA PELA REALIDADE VIRTUAL INTERFERE NA ATIVIDADE CORTICAL DURANTE A VISUALIZAÇÃO DE TAREFAS SACÁDICAS DE TOMADA DE DECISÃO ORIENTADAS POR ESTÍMULOS LUMINOSOS.

Tue, 06 Sep 2022 00:00:00 GMT

A DOENÇA DO MOVIMENTO VISUALMENTE INDUZIDA OCASIONADA PELA REALIDADE VIRTUAL INTERFERE NA ATIVIDADE CORTICAL DURANTE A VISUALIZAÇÃO DE TAREFAS SACÁDICAS DE TOMADA DE DECISÃO ORIENTADAS POR ESTÍMULOS LUMINOSOS. PINHEIRO, Kelma Regina Galeno RESUMO: A doença do movimento visualmente induzida (DMVI) é um termo genérico utilizado para se referir ao tipo de classificação da doença do movimento tradicional, a Cinetose. Em ambientes virtuais, tem sido intitulada como cybersickness com efeitos colaterais, como fadiga ocular, tontura e náuseas além de dificuldade de concentração. Dessa forma, o presente estudo visa demonstrar como a DMVI, ocasionada pela realidade virtual, interfere na atividade cortical durante a visualização de estímulos luminosos para a formação da decisão visual-sacádica por meio da eletroencefalografia tendo como referência a análise da potência absoluta da banda beta parietal e occipital. Para isso 32 participantes do sexo feminino, destras e com idade média de 23,3 ± 3,2 anos foram divididas em grupo controle (GC) e grupo experimental (GE), que desenvolveram a DMVI. As participantes realizaram 120 trilhas de estímulos luminosos, em seguida fizeram uso da realidade virtual e repetiram novamente as trilhas. Os resultados demostraram uma diferença estatisticamente significativa na potência absoluta da banda beta parietal e occipital bilateralmente no GC (p< 0,001) e no córtex occipital direito no GE (p< 0,05), sendo que a atividade dessa banda no GE se manteve superior durante toda a tarefa em relação ao GC. O estudo sugere que a realidade virtual ocasiona uma sobrecarga cognitiva e aumento na demanda de atenção visual para realização da tarefa em ambos os grupos, sendo que em indivíduos sensíveis a DMVI o próprio estímulo luminoso pode desencadear o conflito sensorial. ABSTRACT: Visually induced motion sickness (VIMS) is a generic term used to refer to a specific type of traditional movement disease known as Kinetosis. In virtual environments, it has been titled as cybersickness with side effects, such as eye fatigue, dizziness and nausea plus difficulty concentrating. Thus, the present study aims to demonstrate how the VIMS, caused by the virtual reality, interferes in the cortical activity during the visualization of luminous stimuli for the formation of the visual-saccadic decision by means of the electroencephalography having as reference the analysis of the absolute power of the beta band parietal and occipital. For this, 32 female participants, right-handed and with a mean age of 23.3 ± 3.2 years, were divided into control group (CG) and experimental group (EG), who developed VIMS. The participants performed 120 light stimuli, then made use of virtual reality and repeated the tracks again. The results demonstrated a statistically significant difference in the absolute power of the parietal and occipital beta bands bilaterally in the CG (p <0.001) and in the right occipital cortex in the EG (p <0.05), and the activity of this band in the CG remained higher during the whole task in relation to the CG. The study suggests that virtual reality causes a cognitive overload and an increase in the demand for visual attention to perform the task in both groups, and in individuals who are sensitive to VIMS the light stimulus itself can trigger sensory conflict. Orientador; Prof. Dr. Victor Hugo do Vale Bastos Examinador interno: Prof. Dr. Silmar Silva Teixeira Examinadora externa: Profa. Dra. Juliana Bittencourt Marques (UVA/RJ)