PAPEL DAS CÉLULAS DENDRÍTICAS NO DIRECIONAMENTO DA RESPOSTA DOS LINFÓCITOS T A PEPTÍDEOS SINTÉTICOS DERIVADOS DA PROTEÍNA Hsp70 de Cryptococcus gattii.

Abstract

RESUMO: A criptococose é uma micose sistêmica de significativa morbiletalidade caracterizada por afecções do trato respiratório e meningoencefalite. Diagnostica-se um milhão de casos novos dessa doença por ano, 60% dos quais irão morrer, a despeito das terapias antifúngicas atualmente empregadas. Cryptoccoccus neoformans e Cryptococcus gattii são os agentes etiológicos da criptococose, tendo o segundo recebido notoriedade nas últimas décadas por causar surtos da doença em regiões antes não endêmicas. A sintomatologia da criptococose é confundida com a de outras patologias pulmonares mais comuns e, normalmente, é subdiagnosticada. Por conseguinte, o tratamento ao qual o paciente é submetido não raro é inadequado. Assim, tanto medidas preventivas quanto o desenvolvimento de métodos diagnósticos mais precisos são desejáveis para o controle da criptococose. Recentemente nosso grupo mostrou que tanto a proteína Hsp70 de C. gattii (genótipo VGII) quanto peptídeos dela derivados são alvos de reconhecimento por anticorpos de pacientes com criptococose. Esse achado, que abre possibilidades para o uso daquela proteína e\ou de seus peptídeos como uma ferramenta diagnóstica, também suscitou uma importante pergunta biológica: tais peptídeos são capazes de elicitar respostas de linfócitos T? No presente trabalho, investigamos essa importante pergunta. Especificamente, avaliamos se células dendríticas humanas estimuladas com peptídeos sintéticos da Hsp70 de C. gattii (VGII) são capazes de induzir proliferação de células T autólogas, e se tais linfócitos possuem fenótipo de células T reguladoras (CD4⁺ CD25alto Foxp3⁺). Para tanto, avaliamos a resposta proliferativa de células T (marcadas com CFSE) direcionadas às células dendríticas autólogas previamente pulsadas com os peptídeos sintéticos (H18, H21, H26 e pool) da Hsp70 de C. gattii. Nossos resultados indicam que os peptídeos H18 e H21, isoladamente ou em pool, induzem proliferação de células T autólogas e ativam predominantemente linfócitos T que não expressam o fator de transcrição Foxp3. Os resultados apresentados neste estudo reforçam nossos achados prévios proporcionando o desenvolvimento de novas pesquisas utilizando esses peptídeos como antígenos promissores em imunodiagnóstico e/ou imunoterapia para a criptococose. ------------------ ABSTRACT: Cryptococcosis is a systemic mycosis of significant morbidity and mortality characterized by disorders of the respiratory tract and meningoencephalitis. Diagnostic up one million new cases of the disease each year, 60% of which will die, despite antifungal therapies currently employed. Cryptoccoccus neoformans and Cryptococcus gattii are the etiological agents of the cryptococcosis, the second received notoriety in recent decades to cause outbreaks of the disease in regions previously not endemic. The symptoms of cryptococcosis are confused with others common lung diseases and is usually misdiagnosed. Therefore, the treatment to which the patient is subjected becomes inadequate. Thus, both preventative measures and the development of more accurate diagnostic methods are desirable for control of cryptococcosis. Recently our group showed that both Hsp70 protein C. gattii (genotype VGII) as peptides derived there from are recognized targets for cryptococcosis in patients with antibodies. This finding, which opens possibilities for use of that protein and/or its peptides as a diagnostic tool also elicited significant biological question, such peptides are able to elicit responses of T lymphocytes? In this paper, we investigate this important question. Specifically, we assessed whether human dendritic cells stimulated with the synthetic peptides of the Hsp70 C. gattii (VGII) are able to induce proliferation of autologous T cells, and lymphocytes such phenotype have regulatory T cells (CD4⁺ CD25high Foxp3⁺). Therefore, we evaluated the proliferative response of T cells (CFSE labeled) directed to autologous dendritic cells previously pulsed with synthetic peptides (H18, H21, H26 and pool) of Hsp70 C. gattii. Our results showed that the H18 and H21 peptides, alone or in pool, induces proliferation of autologous T cells and active predominantly T-lymphocytes that do not express the transcription factor Foxp3. The results of this study reinforce our previous findings encouraging the development of new researches using these peptides as promising antigens for immunodiagnostic and/or immunotherapy to cryptococcosis.