RESPOSTA ANTI-INFLAMATÓRIA MEDIADA PELO RECEPTOR MUSCARÍNICO M1 DURANTE A COLITE INDUZIDA POR ÁCIDO ACÉTICO.

Abstract

RESUMO: Introdução: A colite ulcerativa é uma doença inflamatória crônica, recidivante que afeta principalmente o cólon e o reto, e se caracteriza por úlceras na mucosa intestinal. Muitos sistemas endógenos estão envolvidos na fisiologia intestinal, sendo o sistema muscarínico fundamental para esse processo. Além disso, o sistema colinérgico demonstra ação anti-inflamatória em modelos experimentais de colite. No entanto, ainda há poucos estudos sobre o efeito anti-inflamatório muscarínico. Objetivo: Investigar a resposta anti-inflamatória mediada pelo receptor muscarínico M1 durante a colite experimental induzida por ácido acético. Métodos: Foram usados camundongos swiss machos (25–30 g), divididos em grupos de 6 animais. Inicialmente, foi realizada a padronização do modelo de colite induzida por ácido acético a 6% utilizando tempos diferentes (6, 18 e 24h) para a avaliação o pico inflamatório deste modelo. Após a indução da colite por ácido acético os camundongos foram tratados intraperitonialmente (i.p.) com McN-A-343 nas doses de 0,5; 1,0; 1,5 mg/kg ou dexametasona (2 mg/kg, s.c.) com 17h ou 17:30h após a indução da colite, respectivamente. Depois da escolha da concentração do McN-A-343 com melhor efeito anti-inflamatório foi realizado o ensaio para bloquear a ação do receptor muscarínico M1 utilizando a pirenzepina (10 mg/kg, i.p.). Após 18h da indução da colite os animais foram eutanasiados e uma amostra de 5 cm do cólon foi retirado para avaliação dos escores macroscópicos e microscópicos de lesão, peso úmido e dosagens bioquímicas como: atividade da mieloperoxidase, interleucina 1 beta, níveis de glutationa e malonildialdeído. Resultados: Os grupos de animais que receberam ácido acético a 6% intracolônico apresentaram após 18h da indução da colite um aumento significativo do número de lesões inflamatórias intestinais e da concentração de mieloperoxidase, malonildialdeído e uma redução da concentração de glutationa no tecido intestinal em comparação com os outros tempos analisados. Além disso, foi observado que o tratamento com o McN-A-343 na concentração de 1,5 mg/kg apresentou uma redução da lesão intestinal de forma significativa, bem como uma diminuição do peso úmido, da atividade da mieloperoxidase, da concentração da citocina pró-inflamatória IL-1β e dos marcadores de estresse oxidativo in vivo. Por outro lado, foi visto que a coadministração de McN-A- 343 e pirenzepina reverteram de forma significativa o efeito do McN-A-343. Conclusão: Os resultados sugerem que o acido acético foi eficaz em induzir a colite ulcerativa, e que o pico inflamatório deste modelo ocorre após de 18h da indução. Este trabalho ainda infere que o receptor muscarínico M1 está envolvido na reversão do efeito pró-inflamatório da colite induzida experimentalmente, podendo esta via representar uma alternativa terapêutica promissora para pacientes com colite ulcerativa. ------------------ ABSTRACT: Introduction: Ulcerative colitis is a chronic, recurrent inflammatory disease that mainly affects the colon and rectum, and is characterized by ulcers in the intestinal mucosa. Many endogenous systems are involved in intestinal physiology, and the muscarinic system is fundamental to this process. In addition, the cholinergic system demonstrates anti-inflammatory action in experimental models of colitis. However, there are still few studies on the muscarinic anti-inflammatory effect. Objective: To investigate the anti-inflammatory response mediated by the muscarinic receptor M1 during experimental colitis induced by acetic acid. Methods: Male swiss mice (25-30 g) were divided into groups of 6 animals. Initially, the standardization of the 6% acetic acid-induced colitis model using different times (6.18 and 24h) was used to evaluate the inflammatory peak of this model. After induction of colitis by acetic acid the mice were treated intraperitoneally (i.p.) with McN-A-343 at the doses of 0.5; 1.0; 1.5 mg/kg or dexamethasone (2 mg/kg, s.c.) at 17h or 17: 30h after induction of colitis, respectively. After the choice of McN-A-343 concentration with the best anti-inflammatory effect, the assay was performed to block the action of the M1 muscarinic receptor using pirenzepine (10 mg/kg, i.p.). After 18 h of colitis induction, the animals were euthanized and a 5 cm colon sample was taken for evaluation of macroscopic and microscopic lesion, wet weight and biochemical measurements such as: myeloperoxidase activity, interleukin 1 beta, glutathione levels and malonyldialdehyde. Results: The groups of animals receiving 6% intracolonic acetic acid showed a significant increase in the number of intestinal inflammatory lesions and myeloperoxidase concentration, malonildialdehyde and a reduction of glutathione concentration in intestinal tissue after 18 h of colitis induction compared with The other analyzed times. In addition, treatment with McN-A-343 at a concentration of 1.5 mg / kg showed a significant reduction in intestinal damage as well as a decrease in moist weight, myeloperoxidase activity, Proinflammatory cytokine IL-1β and markers of oxidative stress in vivo. On the other hand, it was seen that co-administration of McN-A-343 and pirenzepine significantly reversed the effect of McN-A-343. Conclusion: The results suggest that acetic acid was effective in inducing ulcerative colitis, and that the inflammatory peak of this model occurs after 18 hours of induction. This work further infers that the M1 muscarinic receptor is involved in the reversal of the proinflammatory effect of experimentally induced colitis, which may represent a promising therapeutic alternative for patients with ulcerative colitis.