PREVALÊNCIA E INFLUÊNCIA DOS POLIMORFISMOS -308 G/A (rs1800629) E -238 G/A (rs361525) DO GENE TNF-α EM PACIENTES COM DENGUE, EM UMA POPULAÇÃO DO NORDESTE DO BRASIL.

Abstract

RESUMO: A dengue é uma arbovirose responsável por afetar milhões de pessoas em regiões tropicais e subtropicais no mundo, permanecendo como importante problema de saúde pública por suas crescentes taxas de incidência e morbimortalidade. Pesquisas têm demonstrado que os mecanismos de patogênese da doença são complexos, e que a interação entre fatores inerentes ao Dengue virus (DENV), ao ambiente e ao hospedeiro humano é determinante na susceptibilidade individual à dengue, bem como nas variações das suas manifestações clínicas e no risco de progressão para formas graves. Polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) no gene TNF-α são exemplos de fatores genéticos do hospedeiro implicados na modulação da resposta imune no combate à infecção causada pelo DENV, bem como nas variações entre indivíduos na dinâmica da patogênese da dengue. Considerando a heterogeneidade de resultados dos estudos genômicos de associação em diferentes populações, a presente pesquisa objetivou investigar a prevalência dos SNPs -308 G/A (rs1800629) e -238 G/A (rs361525) do gene TNF-α em pacientes sintomáticos e assintomáticos infectados pelo DENV, e em indivíduos controles oriundos da população da cidade de Parnaíba-PI. Avaliou-se ainda a influência destes SNPs no delineamento das manifestações clínicas dos pacientes com dengue, e seus possíveis papéis na proteção, susceptibilidade e/ou risco de progressão para formas graves da doença. Os SNPs foram investigados por PCR em Tempo Real, com amostras de DNA de 158 pacientes do grupo de casos positivos (DEN), 123 indivíduos do grupo controle, e 83 indivíduos do grupo assintomático (ASS). As análises estatísticas incluíram o Teste de Qui-quadrado (x²) e o Teste Exato de Fisher para verificar o equilíbrio de Hardy-Weinberg na distribuição das frequências genotípicas, alélicas e haplotípicas, Odds Ratio, e o Teste de Wilcoxon Pareado para comparar as distribuições das frequências das manifestações clínicas, sendo considerado p<0,05 como nível de significância. Nas análises das frequências alélicas em ambos os SNPs, a presença do alelo A foi maior no grupo DEN quando comparado ao grupo controle, porém sem diferenças estatisticamente significativas, e quando tais frequências foram comparadas ao grupo ASS, a presença do alelo A foi maior no grupo DEN, porém sem diferenças estatisticamente significativas. Nas análises das frequências genotípicas isoladas em ambos os SNPs, a presença do genótipo G/A + A/A foi maior no grupo DEN quando comparado ao grupo controle, porém sem diferenças estatisticamente significativas, e quando tais frequências foram comparadas ao grupo ASS, a presença destes genótipos foi maior no grupo DEN, porém sem diferenças estatisticamente significativas. Todas as frequências genotípicas se encontraram em equilíbrio de Hardy-Weinberg. As frequências haplotícas dos SNPs do gene TNF-α não mostraram diferenças estatisticamente significativas entre os grupos estudados, e apresentaram baixo desequilíbrio de ligação entre si. Na investigação da prevalência das manifestações clínicas nos indivíduos do grupo DEN, para ambos os SNPs foi observada maior ocorrência em portadores do alelo A do que em portadores não-A, porém sem diferença estatisticamente significativa. As frequências do alelo A de ambos os SNPs deste estudo não diferiram significativamente das distribuições encontradas na maioria das populações do mundo. Em resumo, não foram identificadas associações significativas entre os SNPs -308 G/A e -238 G/A do gene TNF-α e sua influência no delineamento das manifestações clínicas dos pacientes com dengue, bem como seus possíveis papéis na proteção, susceptibilidade e/ou risco de desenvolvimento de formas graves da doença na população norte-piauiense................ABSTRACT: Dengue is an arboviral disease which affects millions of people in tropical and subtropical regions around the world, and it has been an important public health problem due to its increasing incidence of morbidity and mortality rates. Research has demonstrated that the pathogenesis mechanisms of this disease are complex, and interaction between inherent factors in the Dengue virus (DENV), the environment and the human host is determinant in individual susceptibility to Dengue, as well as, in the variations of its clinical manifestations and in the risk of progression to severe forms. Single nucleotide polymorphisms (SNPs) in the TNF-α gene are examples of host genetic factors involved in the modulation of the immune response against infection caused by DENV, as well as, in the variations among patients in terms of dengue pathogenesis. Considering the heterogeneity of results from genomic association studies in different populations, the present study aimed to investigate the prevalence of SNPs -308 G/A (rs1800629) and -238 G/A (rs361525) from TNF-α gene in symptomatic and asymptomatic patients infected by DENV and in control individuals from Parnaíba, Piauí State. The influence of these SNPs on clinical manifestations of dengue patients and their possible roles in the protection, susceptibility and/or risk of progression to severe forms of the disease were also evaluated. SNPs were investigated by Real-Time PCR, with DNA samples from 158 patients from the positive cases group (DEN), 123 from the control group, and 83 from the asymptomatic group (ASS). Statistical analyzes were carried out by using Chi-square Test (x²) and Fisher's Exact Test to verify the Hardy-Weinberg equilibrium in the distribution of genotypic, allelic and haplotype frequencies; moreover, Odds Ratio and Pareto Wilcoxon Test were used to compare the distributions of frequencies of the clinical manifestations, considering p<0.05 as level of significance. In the allelic frequency analyses, the presence of the A allele was higher in the DEN group compared to the control group for both SNPs, but statistic differences were not significant; furthermore, the presence of the A allele was higher in the DEN group when such frequencies were compared to the ASS group, but there were no statistically significant differences. In the analyzes of the genotype frequencies isolated from both SNPs, the presence of the G/A + A/A genotype was higher in the DEN group compared to the control group, but statistic differences were not significant, and when these frequencies were compared to the ASS group, the presence of these genotypes was higher in the DEN group, but there were no statistically significant differences. All genotypic frequencies were in Hardy-Weinberg equilibrium. The haplotype frequencies of the SNPs of the TNF-α gene did not show statistically significant differences between the studied groups, and showed low linkage disequilibrium with each other. In the investigation of the prevalence of clinical manifestations in the individuals of the DEN group, occurrence of A allele carriers was higher than non-A allele carriers for both SNPs, but there were no statistically significant difference. In this study, A allele frequencies for both SNPs did not differ significantly from the distributions found in most of the world's populations. In summary, no significant associations were identified between the SNPs -308 G/A and -238 G/A of TNF-α gene and their influence on the clinical manifestations of dengue patients, as well as, their possible roles in the protection, susceptibility and/or risk of developing severe forms of the disease in the North Piaui population.