PROTEÍNAS RECOMBINANTES E SEU USO NO DIAGNÓSTICO DE LEISHMANIOSE VISCERAL CANINA.

Abstract

RESUMO: O diagnóstico de Leishmaniose Visceral Canina (LVC) é baseado em dados epidemiológicos, achados clínicos e laboratoriais, entretanto ainda é considerado um diagnóstico complexo, visto que algumas doenças compartilham sintomatologia similar. Diferentes técnicas podem ser utilizadas como testes sorológicos, exames parasitológicos e/ou moleculares. Em busca de se obter um método mais específico de diagnóstico sorológico da LV, vem se realizando pesquisas com a utilização de antígenos recombinantes de Leishmania sp., uma vez que o problema na utilização de proteínas totais para o diagnóstico da doença é a existência de reações cruzadas entre soros de animais infectados com outros patógenos. O objetivo deste trabalho foi avaliar o uso de diferentes proteínas recombinantes de Leishmania infantum chagasi no diagnóstico sorológico da leishmaniose visceral canina pelo método de ELISA. O perfil clínico dos animais foi avaliado em pontuações e o somatório dessas pontuações era dado como escore do animal incluído em uma ficha de avaliação. A técnica de ELISA foi realizada utilizando antígeno total de Leishmania (SLA) e sete (07) antígenos recombinantes (LiP2a, LiP2b, LiP0, HSP70, HSP83, KMP-11 e H2A). A leitura das placas foi realizada em espectofotômetro com comprimento de onda de 490 nm, em software SolftMax Pro 5.0. Na análise estatística foi utilizados os testes de ANOVA, Kruskal Wallis e Dunn’s com múltiplas comparações de média e significância de 5%. O ponto de corte de cada antígeno foi estabelecido utilizando-se a curva ROC-AUC, baseado na maior sensibilidade e especificidade. Dentre todas as proteínas testadas, a que apresentou melhor resultado foi a LiP2a, a qual conseguiu discriminar bem soros de cães positivos (sintomáticos e assintomáticos) de cães negativos e distinguiu os animais positivos dos demais grupos (erliquiose canina e vacinados contra a doença), apresentando diferença significativa, além de demostrar melhor desempenho frente ao SLA. Assim, a proteína recombinante LiP2a apresenta-se bastante promissora para ser utilizada com um antígeno alternativo para diagnóstico, com uma boa sensibilidade e especificidade nos testes de ELISA.............ABSTRACT: The diagnosis of Visceral Canine Leishmaniasis (LVC) is based on epidemiological data, clinical and laboratory findings, however it is still considered a complex diagnosis, since some diseases share similar symptoms. Different techniques can be used as serological tests, parasitological and / or molecular tests. In order to obtain a more specific method of serological diagnosis of VL, research has been carried out with the use of recombinant antigens of Leishmania sp., Since the problem in the use of total proteins for the diagnosis of the disease is the existence of reactions Animals infected with other pathogens. The objective of this work was to evaluate the use of different recombinant proteins of Leishmania infantum chagasi in the serological diagnosis of canine visceral leishmaniasis by the ELISA method. The clinical profile of the animals was evaluated in scores and the sum of these scores was given as a score of the animal included in an evaluation form. The ELISA technique was performed using total Leishmania antigen (SLA) and seven (07) recombinant antigens (LiP2a, LiP2b, LiP0, HSP70, HSP83, KMP-11 and H2A). The plates were read in a spectrophotometer with a wavelength of 490 nm in SolftMax Pro 5.0 software. In the statistical analysis, the ANOVA, Kruskal Wallis and Dunn's tests were used with multiple mean and significance comparisons of 5%. The cutoff point of each antigen was established using the ROC-AUC curve, based on the highest sensitivity and specificity. Among all the proteins tested, LiP2a was able to discriminate well from positive dogs (symptomatic and asymptomatic) from negative dogs and distinguished the positive animals from the other groups (canine and vaccinated dogs). Presenting a significant difference, besides showing a better performance against SLA. Thus, the recombinant LiP2a protein is very promising to be used with an alternative diagnostic antigen with good sensitivity and specificity in ELISA tests.