O PAPEL DA MEDULA ÓSSEA NO DESENVOLVIMENTO DA LEISHMANIOSE VISCERAL GRAVE: desvendando os mecanismos inflamatórios e imunossupressores.

Abstract

RESUMO: Introdução: A leishmaniose visceral (LV) ou calazar é uma protozoose causada pela Leishmania infantum nas Américas e pela Leishmania donovani no subcontinente indiano e no leste da África, regiões em que a doença é endêmica. Os pacientes com a doença grave além das manifestações clássicas como febre, anemia e hepatoesplenomegalia apresentam um quadro inflamatório intenso, sangramento e infecções. No Brasil, entre 5 a 10% dos pacientes com LV apresentam desfechos fatais. Entender a patogênese da doença em sua forma grave é importante para o desenvolvimento e a aplicação de novas terapias. Objetivo geral: Verificar o papel da medula óssea (MO) e do sangue periférico (SP) na patogênese da LV, em particular, da doença grave. Metodologia: O presente estudo envolveu 29 pacientes com LV sintomática (grupo LV), 12 pacientes com suspeita clínica inicial mas sem confirmação de LV (grupo sem LV/controle não saudável) e 12 pacientes infectados com Leishmania e HIV (grupo Leishmania/HIV). Os pacientes foram avaliados quanto aos parâmetros clínicos, laboratoriais, imunofenotipagem e expressão de citocinas por leucócitos, além da dosagem de citocinas plasmáticas e do sobrenadante da MO. Resultados. Pacientes com LV apresentaram aumento dos linfócitos B e neutropenia no SP, aumento dos linfócitos T CD4 no SP e na MO quando comparados aos controles não saudáveis. Com relação às citocinas circulantes, pacientes com LV apresentaram níveis elevados de IL-6 e IL-10 no SP quando foram comparados ao grupo controle, enquanto que na MO foram registrados níveis elevados de IL-6, IL-10, INFγ, TNFα e IL-1β. No que diz respeito à expressão de citocinas pelos leucócitos, os monócitos do SP de pacientes com LV produziram significativamente mais IL-10 quando comparados ao grupo controle. O aumento na expressão de IL-6 por linfócitos B, monócitos e linfócitos T CD8 foi observado apenas no SP de pacientes com LV quando comparados ao grupo controle. Células T CD4 apresentaram maior expressão de IL-6 no SP e na MO. Os dados desta pesquisa também permitem sugerir que pacientes com probabilidade de morte acima de 15% podem ser considerados mais graves porque apresentaram níveis mais elevados de IL-6. Linfócitos T CD8+IL6+ e T CD4+IL6+ apresentaram correlação positiva com os níveis plasmáticos de IL-6 e com a probabilidade de morte. Pacientes sem LV, com LV e coinfectados apresentaram níveis significativamente mais elevados de CXCL-8 na MO quando comparado ao SP. Os níveis de TNFα e IL-12 em pacientes coinfectados foram elevados no sangue periférico e na medula óssea. Houve um aumento na %CD14+TNFα+ e %CD14+IL6+ no SP de pacientes coinfectados quando comparados aos pacientes com LV. Elevação da %CD14+IL-10+, %neutrófilos IL-6+ e %TCD8+IL-6+ no SP quando comparado a MO em pacientes coinfectados. Conclusão: Os resultados obtidos nesta pesquisa permitem sugerir que os leucócitos, principalmente os linfócitos T, quando presentes na MO exercem atividade regulatória porque apenas no SP foi registrado expressão significativa de IL-6 pelas células T, que tem atividade inflamatória e está correlacionada com gravidade da doença. Nos pacientes coinfectados, os níveis elevados de IL-12 e TNFα sugerem ativação dos linfócitos T. O estímulo para o aumento na síntese de IL-6 na corrente sanguínea, um importante parâmetro de gravidade, parece não ter origem na medula óssea em pacientes com LV e coinfectados. Assim, outros órgãos parasitados, como o baço, podem desempenhar papel decisivo na doença grave.....................ABSTRACT: Introduction. Visceral leishmaniasis (VL) or calazar is a protozooan disease caused by Leishmania infantum in Americas and Leishmania donovani in Indian subcontinent and in East Africa, regions where the disease is endemic. Patients with severe disease present classical manifestations as fever, anemia and hepatosplenomegaly associated with an intense inflammatory condition, presence of bleeding and infections. In Brazil, 5 to 10% of patients with VL presented fatal outcome. To understand the severe disease pathogenesis is important to the development and application of new therapies. General Objective. Verify the bone marrow (BM)’s and peripheral blood (PB)’s role in VL pathogenesis, in particular, of severe disease. Methodology. The present study was composed by 29 patients with symptomatic VL (VL group), 12 patients with initial clinical suspicion of VL but without VL infection confirmation (no VL group/non healthy group) and 12 patients infected with Leishmania and HIV (Leishmania/HIV group). Patients were evaluated for clinical and laboratorial parameters, immunophenotyping and cytokine expression by leukocytes, besides plasmatic cytokines and bone marrow supernatant dosage. Results: VL patients presented B lymphocytes increase and neutropenia in PB, T CD4 Lymphocytes increase in PB and BM when compared to non-healthy controls. With respect to circulating cytokines, VL patients presented higher levels of IL-6 and IL-10 in PB when compared to control group, while in BM higher levels of IL-6, IL-10, INFγ, TNFα and IL-1β were recorded. Concerning to cytokine expression by leukocytes, VL patients PB monocytes produced significantly more IL-10 when compared to control group. The increase in IL-6 expression by B lymphocytes, monocytes and T CD8 Lymphocytes was observed only in VL patient’s PB when compared to control group. T CD4 cells presented higher IL-6 expression in PB and BM. This research data also permit to suggest that patients with death probability above 15% can be considered more severe because they presented higher levels of IL-6. T CD8+IL6+ and T CD4+IL6+ Lymphocytes presented positive correlation with IL-6 plasmatic levels and death probability. No VL, VL and co-infected patients presented significantly higher levels of CXCL-8 in BM when compared to PB. TNFα and IL-12 levels in co-infected patients were high in peripheral blood and bone marrow. There was an increase of %CD14+TNFα+ and %CD14+IL6+ in PB of co-infected patients when compared to VL patients. %CD14+IL-10+, %neutrophils IL-6+ and %TCD8+IL-6+ elevation in PB when compared to BM of co-infected patients. Conclusion. The obtained results in this research allows to suggest that leucocytes, mainly T lymphocytes, when present in BM, they exercise regulatory activities because it was recorded, only in PB, significant IL-6 expression by T cells, that has inflammatory activity and it is related with disease severity. In co-infected patients, IL-12 and TNFα high levels suggest T lymphocytes activation. The stimulus to IL-6 syntheses increase in blood flow, an important severity parameter, it seems to have no origin in VL and co-infected patients’ bone marrow. Thus, other parasitized organs, like spleen, they may play a decisive role in severe disease. Key words: severe visceral Leishmaniasis, systemic inflammation, IL-6, IL-10.