USO DE FORMULAÇÃO TÓPICA NANOESTRUTURADA DE OSELTAMIVIR NO TRATAMENTO DA LEISHMANIOSE TEGUMENTAR EM CAMUNDONGOS BALB/c INFECTADOS COM Leishmania major

Abstract

RESUMO: As leishmanioses são um conjunto de doenças parasitárias causadas por protozoários do gênero Leishmania, estando entre as cinco doenças negligenciadas mais importantes. Estudos recentes indicam que a gravidade das leishmanioses em diferentes espécies pode ser influenciada pela presença do Leishmania RNA Virus (LRV 1 e LRV 2). Ambos os vírus de RNA aumentam a replicação do parasita, sua patologia e a gravidade das lesões. Os medicamentos utilizados no tratamento das leishmanioses são limitados, onerosos, de administração parenteral, com duração relativamente longa e relatos de resistência parasitária. A pesquisa e o desenvolvimento de medicamentos podem levar décadas; nesse contexto, o reposicionamento de fármacos se apresenta como uma opção para reduzir tempo e custos financeiros, pois consiste em explorar uma nova atividade farmacológica para uma substância já utilizada. O objetivo deste estudo foi investigar o potencial terapêutico in vivo do antiviral Oseltamivir (OSV) em microemulsão de uso tópico para o tratamento da leishmaniose tegumentar cutânea em camundongos BALB/c infectados com Leishmania major, tanto como monoterapia quanto em combinação com a Anfotericina B convencional. As formulações foram preparadas e testadas quanto às características estruturais e organolépticas, além da cinética de liberação. Os camundongos BALB/c (CEUA/UFPI 750/2022) foram infectados na região da base da cauda com 1 × 106 promastigotas metacíclicas de L. major. Após 40 dias, os animais foram divididos em cinco grupos (n = 8): controle (tratado com microemulsão vazia), Anf B 3%, OSV 0,5%, OSV 1%, e OSV 1% + Anf B 1,5%. Os animais foram tratados duas vezes ao dia, por 21 dias consecutivos, com 50 μL da formulação tópica, e foram avaliados clinicamente quanto ao peso e ao tamanho das lesões. A eutanásia para coleta de material biológico e ensaios ex vivo foi realizada ao final do tratamento. A carga parasitária foi avaliada utilizando a técnica de diluição limitante e, após 5 dias de cultura, foi observada a presença ou ausência das formas promastigotas. O sangue coletado foi utilizado para ensaios de hematócrito e bioquímicos. Os tamanhos médios das lesões dos grupos ao final do tratamento foram 6,85 mm, 4,52 mm, 4,40 mm, 5,05 mm e 4,82 mm para os grupos Controle, Anf B 3%, OSV 0,5%, OSV 1% e OSV 1% + Anf B 1,5%, respectivamente. Quanto à carga parasitária nos camundongos, observou-se uma redução significativa nos parasitas recuperados do local da lesão, especialmente nos grupos Anf B 3%, OSV 0,5%, OSV 1% e OSV 1% + Anf B 1,5%, quando analisados em escala logarítmica, com respectivos percentuais de 70%, 76,5%, 72,5% e 70%. O grupo tratado com Anf B 3% exibiu toxicidade, conforme indicado pelo aumento nos níveis das enzimas bioquímicas correspondentes às funções renal e hepática, ao contrário dos grupos tratados com Oseltamivir, tanto como monoterapia quanto em combinação com Anfotericina B, que apresentaram níveis normais de enzimas séricas. Todos os grupos de tratamento mostraram redução no hematócrito; no entanto, os grupos tratados com Oseltamivir demonstraram uma diminuição menos pronunciada. Todos os grupos mantiveram o peso corporal dentro dos intervalos normais. No exame histopatológico, os grupos de Oseltamivir apresentaram menores graus de alterações histopatológicas. Os grupos tratados com Oseltamivir, tanto como monoterapia quanto em combinação com Anfotericina B, mostraram resultados terapêuticos semelhantes ao grupo tratado com anfotericina B convencional. Em contraste com a Anfotericina B, esses grupos não apresentaram qualquer toxicidade. Portanto, o uso de Oseltamivir, tanto como monoterapia quanto em combinação com Anfotericina B, é promissor para o tratamento da leishmaniose tegumentar cutânea. ABSTRACT: Leishmaniasis is a group of parasitic diseases caused by protozoa of the genus Leishmania, and they are among the five most important neglected diseases. Recent studies indicate that the severity of leishmaniasis in different species may be influenced by the presence of Leishmania RNA Virus (LRV 1 and LRV 2). Both RNA viruses increase parasite replication, pathology, and the severity of lesions. The medications used in the treatment of leishmaniasis are limited, costly, require parenteral administration, have relatively long treatment durations, and there are reports of parasitic resistance. Research and development of new drugs can take decades. In this context, drug repositioning appears as an option to reduce time and financial costs, as it involves exploring new pharmacological activities for substances already in use. The aim of this study was to investigate the in vivo therapeutic potential of the antiviral Oseltamivir (OSV) in topical microemulsion for the treatment of cutaneous leishmaniasis in BALB/c mice infected with Leishmania major, both as monotherapy and in combination with conventional Amphotericin B (Amf B). The formulations were prepared and tested for structural and organoleptic characteristics, as well as release kinetics. BALB/c mice (CEUA/UFPI 750/2022) were infected at the tail base with 1 x 106 metacyclic promastigotes of L. major. After 40 days, the animals were divided into five groups (n = 8): control (treated with empty microemulsion), Amf B 3%, OSV 0.5%, OSV 1%, and OSV 1% + Amf B 1.5%. The animals were treated twice a day for 21 consecutive days with 50 μl of the topical formulation, and were clinically evaluated for weight and lesion size. Euthanasia for biological material collection and ex vivo assays was performed at the end of the treatment. The parasitic load was evaluated using the limiting dilution technique, and after 5 days of culture, the presence or absence of promastigote forms was observed. The collected blood was used for hematocrit and biochemical assays. The average lesion sizes of the groups at the end of the treatment were 6.85 mm, 4.52 mm, 4.40 mm, 5.05 mm, and 4.82 mm for the Control, Amf B 3%, OSV 0.5%, OSV 1%, and OSV 1% + Amf B 1.5% groups, respectively. Regarding the parasitic load in the mice, a significant reduction in parasites recovered from the lesion site was observed, especially in the Amf B 3%, OSV 0.5%, OSV 1%, and OSV 1% + Amf B 1.5% groups, when analyzed on a logarithmic scale, with respective percentages of 70%, 76.5%, 72.5%, and 70%. The group treated with Amf B 3% exhibited toxicity, as indicated by increased levels of biochemical enzymes corresponding to renal and hepatic functions. In contrast, the groups treated with Oseltamivir, both as monotherapy and in combination with Amphotericin B, showed normal serum enzyme levels. All treatment groups showed a reduction in hematocrit; however, the groups treated with Oseltamivir demonstrated a less pronounced decrease. All groups maintained total body weight within normal ranges. Histopathological examination revealed that the Oseltamivir-treated groups had less severe histopathological alterations. The groups treated with Oseltamivir, both as monotherapy and in combination with Amphotericin B, showed therapeutic results similar to the group treated with conventional Amphotericin B. In contrast to Amphotericin B, these groups did not show any toxicity. Therefore, the use of Oseltamivir, both as monotherapy and in combination with Amphotericin B, is promising for the treatment of cutaneous leishmaniasis.