AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTILEISHMANIA IN VITRO DO OSELTAMIVIR E ACICLOVIR E SEUS EFEITOS EM LARVAS DE TENEBRIO MOLITOR INFECTADAS COM LEISHMANIA AMAZONENSIS

Abstract

RESUMO: As leishmanioses são doenças causadas por protozoários do gênero Leishmania. O tratamento disponível atualmente, apresenta alta toxicidade, elevado custo, resistência do parasito, além de dificuldades de adesão dos pacientes por serem de administração parenteral e de longa duração. Devido a isso, a procura por novos fármacos e/ou alternativas terapêuticas é de extrema importância e neste sentido o reposicionamento de fármacos torna-se promissor por possuir vantagens e já terem passado por diversos estudos de segurança e eficácia. O objetivo deste estudo foi avaliar as atividades antileishmania, citotóxica, imunomoduladora dos fármacos Oseltamivir (OSV) e Aciclovir (ACV). Para tanto, foram realizados protocolos de atividade antileishmania sobre formas promastigotas de Leishmania (L.) amazonensis, Leishmania (V.) brasiliensis, Leishmania (L.) infantum e Leishmania (L.) major, citotoxicidade sobre macrófagos murinos e eritrócitos de carneiro, bem como avaliação da atividade contra formas amastigotas internalizadas em macrófagos. Foram realizados ensaios de ativação de macrófagos como atividade lisossomal, capacidade fagocítica e avaliação da indução na produção de óxido nítrico em macrófagos, bem como avaliação da toxicidade aguda com os protocolocos de melanização, mieloroxidade e nitrito, diferencial hemocitário, alterações celulares, plasmatócitos infectados e carga parasitária sobre as larvas de Tenebrio molitor. As substâncias demonstraram potencial antileishmania; os valores de concentração inibitória média (CI50) do OSV contra as diferentes espécies: L. amazonensis, L. braziliensis, L. infantum e L. major foram: 252,321; 268,161; 29,207 e 143,859 μg/mL respectivamente e do ACV foram: 25,726; 45,552; 580,741 e 608,981μg/mL, respectivamente. As concentrações citotóxicas médias (CC50) do OSV e ACV foram 512,17 e 2568,75 μg/mL, respectivamente. OSV e ACV reduziram significativamente o percentual de macrófagos infectados, com índice de seletividade (IS) >20. OSV e o ACV causaram aumento da capacidade fagocítica, contudo não exibiram aumento da atividade lisossomal e nem da indução significativa da síntese de óxido nítrico. Quanto à toxicidade aguda, as taxas de sobrevivência das larvas de T. molitor foram de 71,43% para o Oseltamivir e 92,86% para o Aciclovir. As taxas de melanização, mieloperoxidade e nitrito apresentaram baixos valores para OSV e ACV comparados com os valores para AnfB. Para o diferencial hemocitário e as alterações celulares a predominância foi granulócitos e plasmatócitos além de aumento com as substâncias, os plasmatócitos ativados apresentaram maiores valores e a carga parasitária diminuiu na presença de OSV e ACV, sendo 5% para o Oseltamivir e 15% para o Aciclovir comparados com a Anfotericina B que foi 16,6%. Os resultados deste estudo são promissores e servem como ponto de partida para a realização de pesquisas posteriores que visem novos fármacos para a terapêutica das leishmanioses. ABSTRACT: Leishmaniasis is a disease caused by protozoa of the genus Leishmania. The treatment currently available has high toxicity, high cost, parasite resistance, in addition to difficulties in patient adherence due to parenteral and long-term administration. Due to this, the search for new drugs and/or therapeutic alternatives is extremely important, in this sense, the repositioning of drugs becomes promising because it has advantages because they have already undergone several safety and efficacy studies. The aim of this study was to evaluate the antileishmania, cytotoxic, and immunomodulatory activities of the

drugs Oseltamivir (OSV) and Acyclovir (ACV). To this end, protocols of anti- leishmania activity were carried out on promastigotes of Leishmania (L.)

amazonensis, Leishmania (V.) brasiliensis, Leishmania (L.) infantum and Leishmania (L.) major, cytotoxicity on murine macrophages and sheep erythrocytes, as well as evaluation of activity against internalized amastigote forms in macrophages. Macrophage activation assays were carried out such as lysosomal activity, phagocytic capacity and evaluation of induction in nitric oxide production in macrophages, as well as evaluation of acute toxicity with melanization, myelotoxicity and nitrite protocols, hemocyte differential, cellular alterations, infected plasma cells and parasite load on Tenebrio molitor larvae. The substances demonstrated anti-leishmania potential; the mean inhibitory concentration (IC50) values of OSV against the different species: L. amazonensis, L. braziliensis, L. infantum and L. major were: 252.321; 268,161; 29.207 and 143.859 μg/mL respectively and the ACV were: 25.726; 45,552; 580.741 and 608.981μg/mL, respectively. The mean cytotoxic concentrations (CC50) of OSV and ACV were 512.17 and 2568.75 μg/mL, respectively. OSV and ACV significantly reduced the percentage of infected macrophages, with a selectivity index (SI) >20. OSV and ACV caused an increase in phagocytic capacity, but did not exhibit an increase in lysosomal activity or significant induction of nitric oxide synthesis. Regarding acute toxicity, the survival rates of T. molitor larvae were 71.43% for oseltamivir and 92.86% for acyclovir. The melanization, myeloperoxide and nitrite rates showed low values for OSV and ACV. For the hemocyte differential and cellular alterations, granulocytes and plasma cells predominate, in addition to an increase with the substances, activated plasma cells presented higher values and the parasite load decreased in the presence of OSV and ACV, being 5% for Oseltamivir and 15% for Acyclovir compared to Amphotericin B, which was 16.6%. The results of this study are promising and serve as a starting point for further research aimed at new drugs for the treatment of leishmaniasis.