EXPRESSÃO DE CITOCINAS EM BAÇO DE CÃES COM LEISHMANIOSE VISCERAL SUBMETIDOS A IMUNOQUIMIOTERAPIA

Abstract

RESUMO A Leishmaniose Visceral (LV) é uma doença tropical, parasitária e negligenciada, que afeta seres humanos e diversos animais vertebrados, apresentando alta morbidade e mortalidade. O cão doméstico (Canis lupus familiaris) é reconhecido como o principal reservatório urbano doméstico da doença. Uma resposta imune específica ao parasita é essencial para a proteção do animal infectado, uma vez que a resposta deficiente de células T e a falta de ativação de macrófagos estão associadas à susceptibilidade e a progressão da forma doença grave da infecção. A vacinação é um caminho promissor para proteger vertebrados contra a LV, servindo tanto como imunoprofilaxia para prevenir a infecção quanto como imunomodulador para mitigar a doença grave. Neste estudo, avaliamos a resposta imune em cães naturalmente infectados tratados com Leish-110f+SLA-SE, um candidato a vacina composto por uma poliproteína, associada a um agonista do receptor Toll-like 4 como adjuvante. Comparamos amostras de baço de 19 cães naturalmente infectados com L. infantum, divididos em três grupos experimentais: Grupo 1 - Alopurinol: animais tratados com alopurinol de forma isolada (20 mg/kg, via oral, uma vez ao dia, durante 90 dias); Grupo 2 - Leish F2+ SLA-SE: receberam injeções subcutâneas com a formulação Leish110f combinada a um adjuvante lipídico de segunda geração em emulsão estável (F2+SLA-SE), totalizando seis doses em intervalos de 21 dias, associados com alopurinol oral (20 mg/kg, durante 90 dias); e Grupo 3 - INT- Animais naturalmente infectados com L. infantum não submetidos a tratamento. Após 365 dias, todos os animais foram eutanasiados e fragmentos de baço foram coletados para análise. Os animais tratados apenas com alopurinol apresentaram níveis mais altos de mRNA codificando para IL- 10 e TGF-β com níveis mais baixos de iNOS e TNF-α em comparação com aqueles que receberam imunoquimioterapia. No entanto, ambos os grupos apresentaram níveis acima dos observados nos animais de controle não tratados. Notavelmente, os animais tratados com imunoquimioterapia (alopurinol combinado com o candidato a vacina) demonstraram redução da carga parasitária e melhora clínica sustentada em comparação tanto ao grupo tratado com alopurinol quanto ao grupo não tratado. Os resultados sugerem que a imunoquimioterapia com ix Leish-F2+SLA-SE associada ao alopurinol aumenta as citocinas implicadas em uma resposta imune protetora contra L. infantum, contribuindo provavelmente para a melhora clínica além dos efeitos observados com o alopurinol de forma isolada. Em resumo, esses achados elucidam os mecanismos subjacentes às melhorias clínicas previamente relatadas por nosso grupo e fortalecem o argumento de que essa abordagem é uma alternativa terapêutica promissora para cães com leishmaniose visceral canina. ABSTRACT Visceral Leishmaniasis (VL) is a significant tropical, parasitic, and neglected disease that affects men and various vertebrate animals, leading to high morbidity and mortality. The domestic dog (Canis lupus familiaris) is recognized as the main urban domestic parasite reservoir. A parasite-specific immune response is crucial to protection, while a deficient T-cell response and lack of macrophage activation are associated to susceptibility and severe disease. Vaccination is a promising path to protect vertebrates against VL, serving either as immunoprohylaxis to prevent infection or as an immunomodulator to mitigate severe disease. In this study, we evaluate the immune response in naturally-infected dogs treated with Leish- 110f+SLA-SE, a vaccine candidate consisting of a polyprotein, associated to a Toll-like receptor 4 agonist as adjuvant. We compared spleen samples from 19 dogs naturally infected with L. infantum divided into three experimental groups: Group 1 - Allopurinol : animals treated with allopurinol alone (20 mg/kg, orally, once a day, for 90 days); Group 2 - Leish F2+SLA- SE + Allo: received subcutaneous injections with the Leish110f formulation combined to a second-generation lipid adjuvant in a stable solution (F2+SLA-SE), totaling six doses at 21day intervals, along with oral allopurinol (20 mg/kg, for 90 days), and Group 3 - INT -Untreated animals infected with L. infantum without any treatment. After 365 days, all animals were euthanized and spleen fragments were collected for analysis. The animals treated with allopurinol alone had higher levels of mRNA coding for IL-10 and TGF-β with lower levels of iNOS and TNF-α compared to those receiving immunochemotherapy. However, both groups showed levels above those observed in untreated control animals. Notably, animals treated with immunochemotherapy (allopurinol combined with the vaccine candidate) demonstrated reduced parasitic load and sustained clinical improvement compared to both the allopurinol- treated and the untreated group. The results suggest that immunochemotherapy with Leish- F2+SLA-SE associated with allopurinol enhances cytokines implicated to a protective anti- leishmania immune response likely contributing to xi clinical improvement beyond the effects observed with allopurinol alone. In summary, these findings elucidate the mechanisms underlying the clinical improvements previously reported by our group and strengthen the case for this approach as a promising therapeutic alternative for dogs with canine visceral leishmaniasis (CVL).