ANÁLISE COMPARATIVA DA EXPRESSÃO GÊNICA DE MARCADORES DE DIFERENCIAÇÃO MESENQUIMAL EM LINHAGENS DE CÉLULAS SINALIZADORAS MEDICINAIS ISOLADAS DA MEDULA ÓSSEA E TECIDO ADIPOSO SUBCUTÂNEO MURINO

Abstract

RESUMO A evolução da compreensão sobre a origem e identidade de células sinalizadoras medicinais (MSC) tem levado a uma nova perspectiva sobre suas funções e aplicações terapêuticas. A relação entre as diferentes subpopulações/linhagem de MSCs, sua capacidade de diferenciação in vitro, seu imunofenótipo e, subsequentemente, sua expressão gênica ainda são pouco conhecidos, permanecendo relevantes incertezas sobre a real plasticidade das MSCs e o seu potencial terapêutico. Desta forma, o presente trabalho tem como objetivo comparar a expressão gênica de alguns genes relacionados à diferenciação osteogênica, condrogênica e adipogênica antes e após a indução de diferenciação in vitro, em MSCs oriundas da medula óssea (BMMSC) e tecido adiposo (ADSC) subcutâneo murino. Para isto, as células foram coletadas, isoladas e cultivadas até a terceira passagem sob condições controladas de CO2 e temperatura. Foram realizados ensaios de prolificidade por Scratch Wound Healing, imunofenotipagem para os anticorpos CD90, CD45, CD105 e CD14, ensaio de plasticidade através da indução à diferenciação in vitro e análise de expressão gênica por técnica de qPCR para os genes: OTP, IBS, BMP2 e OTX para linhagem osteogênica; LPL e ADIPOQ para linhagem adipogênica; COLL II e AGGRECAN para linhagem condrogênica. Sob as condições experimentais do presente estudo, o tecido de origem de coleta exerceu efeito sobre a expressão da maior parte dos marcadores de diferenciação mesenquimal. As BMMSCs indiferenciadas apresentaram maior expressão in vitro dos genes associados às linhagens osteogênica, condrogênica e adipogênica, mas não se evidenciou expressão gênica típica de osteoblastos e adipócitos em BMMSCs diferenciadas. A expressão gênica relacionada a condrogênese foi considerada inconclusiva, não sendo possível afirmar, com segurança, se houve ou não diferenciação verdadeira. A expressão tanto de marcadores considerados fatores de transcrição ou de crescimento indutores de diferenciação, denotam o provável potencial modulador in vitro de BMMSCs e ADSCs para as diferenciações mesenquimais estudadas.

ABSTRACT The evolution of understanding about the origin and identity of medicinal signaling cells (MSC) has led to a new perspective on their functions and therapeutic applications. The relationship between the different subpopulations/lineages of MSCs, their ability to differentiate in vitro, their immunophenotype and, subsequently, their gene expression are still poorly understood, with relevant uncertainties about the real plasticity of MSCs and their therapeutic potential. Thus, the present work aims to compare the gene expression of some genes related to osteogenic, chondrogenic and adipogenic differentiation before and after in vitro induction of differentiation in MSCs originating from bone marrow (BMMSC) and subcutaneous adipose tissue (ADSC) murine. For this, cells were collected, isolated and cultured until the third passage under controlled conditions of CO2 and temperature. Prolificity assays were carried out by Scratch Wound Healing, immunophenotyping for CD90, CD45, CD105 and CD14 antibodies, plasticity assay through in vitro differentiation induction and gene expression analysis by qPCR technique for the genes: OTP, IBS, BMP2 and OTX for osteogenic lineage; LPL and ADIPOQ for adipogenic lineage; COLL II and ACCAN for chondrogenic lineage. Under the experimental conditions of the present study, the tissue from which the sample was collected had an effect on the expression of most mesenchymal differentiation markers. Undifferentiated BMMSCs showed higher in vitro expression of genes associated with osteogenic, chondrogenic and adipogenic lineages, but there was no evidence of gene expression typical of osteoblasts and adipocytes in differentiated BMMSCs. Gene expression related to chondrogenesis was considered inconclusive, and it is not possible to state with certainty whether or not there was true differentiation. The expression of both markers considered transcription or growth factors that induce differentiation, denote the probable in vitro modulating potential of BMMSCs and ADSCs for the mesenchymal differentiations studied.