DIVERSIDADE FÚNGICA E TRANSMISSÃO DE Colletotrichum truncatum E Macrophomina phaseolina EM SEMENTES DE FEIJÃO-FAVA

Abstract

RESUMO: No Brasil, a espécie Phaseolus lunatus L., conhecida como feijão-fava, é cultivada predominantemente por pequenos produtores. Informações a respeito do manejo da cultura são escassas, bem como dos patógenos e das doenças que a afetam. A ocorrência de doenças e a falta de qualidade das sementes são as principais causas da baixa produtividade, visto que muitos patógenos como os fungos, podem ser transmitidos da semente para a planta. A análise fitossanitária de sementes pode fornecer informações essenciais para adoção de medidas de controle sobre lotes de sementes, na certificação etc. Entre os fungos fitopatogênicos do feijão-fava destacam-se Colletotrichum truncatum e Macrophomina phaseolina, causadores da antracnose e podridão de carvão respectivamente. Diante da escassez de informações acerca da sanidade e transmissão de fungos por sementes de feijão-fava, objetivou-se avaliar a incidência fúngica em sementes de 34 acessos de feijão-fava e verificar a possibilidade de transmissão de C. truncatum e M. phaseolina pelas sementes através do método da restrição hídrica na inoculação de sementes. Para os estudos da análise sanitária, lotes de 400 sementes de cada acesso foram desinfestadas por imersão em solução de hipoclorito de sódio (NaOCl) a 1 % por 3 minutos, seguido de duas lavagens com água destilada esterilizada e depositadas em placas de Petri contendo meio de cultura batata-dextrose-ágar. Após incubação foram identificados pelos caracteres morfológicos 22 gêneros de fungos, entre eles os fitopatógenos Colletotrichum truncatum (incidência de 0,9 5%), Fusarium spp. (1,27 %), Macrophomina phaseolina (1,58 %), Rhizoctonia solani (0,01 %) e Sclerotium sp. (0,28 %). Os fungos Aspergillus spp., Penicillium spp., Curvularia sp. e Monilinia sp. corresponderam juntos a 63,76 % das colônias observadas. O sequenciamento e análise filogenética dos genes GAPDH e TEF identificaram C. truncatum e M. phaseolina, respectivamente. Para os estudos de transmissão, adicionou-se manitol ao meio de cultura batata-dextrose-ágar (BDA) obtendo-se meios com diferentes potenciais hídricos os quais foram incubados por diferentes períodos de tempo, consistindo nos seguintes tratamentos: T1: 0,0 MPa SI (sem inóculo) por 48 h; T2: 0,0 MPa CI (com inóculo) por 48h; T3: - 0,2 MPa por 48h; T4: -0,4 MPa por 48h; T5: -0,6 MPa por 72h; T6: - 0,8 MPa por 96h e T7: -1,0 MPa por 120h. As sementes foram incubadas a 25º C, com fotoperíodo de 12 horas, permanecendo nestas condições por períodos variáveis. Os parâmetros avaliados foram teste de germinação em rolo de papel, emergência de plântulas em areia e teste de sanidade de sementes. O T4 proporcionou melhores condições para impedir temporariamente a germinação das sementes, promovendo maior incidência de sementes infectadas por C. truncatum e maior porcentagem de plântulas doentes. A metodologia foi eficaz na inoculação de M. phaseolina nas sementes, entretanto, o patógeno prejudicou a germinação das sementes, independente do tratamento inoculado. Ambos os fungos são transmitidos da semente para plântula de feijão-fava, causando doença em diferentes órgãos aéreos. ABSTRACT: In Brazil, Phaseolus lunatus L. species, known as lima bean is grown mainly by small farmers. Information about crop management are scarce, as well as pathogens and the diseases that affect it. The occurrence of diseases and the lack of quality of the seeds are the main causes of low productivity, since many pathogens such as fungi can be transmitted to the plant seed. The plant seed testing can provide essential information for adopting control measures on seed lots, certification and so on. Among the pathogenic fungi of lima bean stand out Colletotrichum truncatum and Macrophomina phaseolina, causing anthracnose and charcoal rot respectively. Considering the lack of information about health and transmission of fungal lima bean seeds, we had the objective of evaluate the fungal incidence in 34 lima bean seeds access and verify the possibility of C. truncatum and M. phaseolina by transmission seeds through the water restriction in seed inoculation. For studies of health analysis, batches of 400 seeds each access was sterilized by immersion in sodium hypochlorite (NaOCl) solution of 1 % for 3 minutes, followed by two washes with sterile distilled water and placed in Petri dishes containing medium Potato Dextrose Agar (PDA) . After incubation, we could identify the morphological characters 22 genera of fungi, including the pathogens Colletotrichum truncatum (incidence 0,95 %), Fusarium spp. (1,27 %), Macrophomina phaseolina (1,58 %), Rhizoctonia solani (0,01 %) and Sclerotium sp. (0,28 %). The Aspergillus spp., Penicillium spp., Curvularia sp. and Monilinia sp. corresponded together 63,76 % of the observed colonies. The sequencing and phylogenetic analysis of GAPDH and TEF genes identified C. truncatum and M. phaseolina, respectively. For transmission studies, mannitol was added to the medium PDA obtaining media with different water potentials which were incubated in different lengths of time consisting of the following treatments: T1: 0.0 MPa SI (without inoculum) for 48 hours; T2: 0.0 MPa CI (with inoculum) for 48 hours; T3: - 0.2 MPa for 48 hours; T4: -0.4 MPa for 48 hours; T5: -0.6 MPa for 72 hours; T6: - 0.8 MPa for 96 hours and T7: -1.0 MPa for 120 hours. The seeds were incubated at 25 °C, with a photoperiod of 12 hours, remained for varying periods. The evaluated parameters were germination test on roll paper, seedling emergence in sand and seed health testing. T4 provided better conditions to temporarily prevent the germination of seeds, promoting higher incidence of seeds infected by C. truncatum and higher percentage of sick seedlings. The methodology was effective in inoculating M. phaseolina in the seeds, however, the pathogen damaged the germination of seeds, regardless of treatment inoculated. Both fungi are transmitted from seed to lima bean seedling, causing disease in different aerial organs.