EFEITO DA ADIÇÃO DO JAMBOLÃO (Syzygium cumini) E DO ÁCIDO PALMÍTICO AO DILUIDOR TRIS-GEMA NA CRIOPRESERVAÇÃO DE SÊMEN OVINO

Abstract

RESUMO A preservação das características espermáticas durante a criopreservação é essencial, porém essa técnica ainda causa bastante efeitos deletérios ás celulas. Objetivou-se avaliar os efeitos da suplementação de ácido palmítico (AP) em duas concentrações (100μM e 200μM), do extrato de jambolão (J-0,1mol) e da combinação dos dois antioxidantes em um diluidor para criopreservação de espermatozoides ovinos, na qualidade seminal. Seis carneiros da raça Dorper foram utilizados, sendo coletadas seis amostras por animal com o auxílio de uma fêmea em estro, utilizando uma vagina artificial. Após a avaliação imediata positiva dos ejaculados, foi feito o pool destes, diluído em TRIS-Gema e dividido em dois experimentos. O experimento I abordou três grupos: Controle, T1 (AP-100μM), T2 (AP-200μM). O segundo experimento abordou os grupos: Controle, T1 (AP-100μM + J-0,1mol), T2 (AP-200μM + J-0,1mol) e T3 (J-0,1mol). As amostras foram envasadas em palhetas de 0,25ml e criopreservadas com uso da máquina TK 3000®. Após 15 dias de armazenamento em botijão criogênico foram realizadas as análises pós-criopreservação, incluindo o teste de termorresistência (TTR), integridade da membrana plasmática, funcionalidade da mitocôndria e cinética espermática pelo sistema de análise computadorizada de sêmen (CASA). O teste de Shapiro – Wilk foi realizado para verificar se os dados seguiram distribuição normal. A Análise de Variância (ANOVA) e o teste não paramétrico H de Kruskal-Wallis foram utilizados para verificar diferenças entre as médias dos grupos, enquanto que o teste não paramétrico de Wilcoxon foi utilizado para comparar as médias antes e após a congelação. O teste não-paramétrico de Friedman foi utilizado para verificar diferenças entre os tempos e o post-hoc foi aplicado para verificar diferenças em pares. Os dados foram digitados no Excel e analisados no programa IBM Statistical Package for the Social Sciences versão 20.0, adotando-se um nível de significância de 5% (p<0,05). Durante a análise da integridade da membrana plasmática no experimento I, observou-se um resultado significativo no T1 e T2 em relação ao grupo controle (p<0,05). No experimento II não foram observadas diferenças significativas entre os tratamentos e o grupo controle nas análises feitas. Conclui-se que a adição do ácido palmítico ao diluidor Tris-gema na concentração de 100 μM e 200 μM é capaz de preservar a integridade da membrana plasmática e a cinética espermática durante o processo de criopreservação do sêmen ovino. A adição de 0,1mol de extrato de jambolão e a associação ao ácido palmítico no Tris-gema não apresentou efeitos significativos na qualidade pós-criopreservação do sêmen ovino.

ABSTRACT Preservation of sperm characteristics during cryopreservation is essential, however, this technique still causes significant deleterious effects on the cells. The objective of this study was to evaluate the effects of supplementation with palmitic acid (PA) at two concentrations (100μM and 200μM), jambolan extract (J-0.1mol), and the combination of both antioxidants in a diluent for cryopreservation of ovine sperm on seminal quality. Six Dorper rams were used, with six samples collected per animal using an artificial vagina with the assistance of an estrus female. After immediate positive evaluation of the ejaculates, a pool was made, diluted in Tris-egg yolk, and divided into two experiments. Experiment I included three groups: Control, T1 (PA-100μM), T2 (PA-200μM). The second experiment included the following groups: Control, T1 (PA-100μM + J-0.1mol), T2 (PA-200μM + J-0.1mol), and T3 (J-0.1mol). The samples were packaged in 0.25ml straws and cryopreserved using the TK 3000® machine. After 15 days of storage in a cryogenic tank, post-cryopreservation analyses were performed, including thermoresistance test (TTR), plasma membrane integrity, mitochondrial functionality, and sperm kinetics using the computer-assisted sperm analysis (CASA) system. The Shapiro-Wilk test was performed to verify whether the data followed a normal distribution. Analysis of variance (ANOVA) and the non-parametric Kruskal-Wallis H test were used to determine differences between the group means, while the non-parametric Wilcoxon test was used to compare means before and after freezing. The non-parametric Friedman test was used to determine differences between times, and post-hoc analysis was applied to determine pairwise differences. The data were entered into Excel and analyzed using IBM Statistical Package for the Social Sciences version 20.0, adopting a significance level of 5% (p<0.05). In the analysis of plasma membrane integrity in Experiment I, a significant result was observed in T1 and T2 compared to the control group (p<0.05). In Experiment II, no significant differences were observed between the treatments and the control group in the performed analyses. In conclusion, the addition of palmitic acid to the Tris-egg yolk diluent at concentrations of 100 μM and 200 μM is capable of preserving plasma membrane integrity and sperm kinetics during the cryopreservation process of ovine semen. The addition of 0.1mol of jambolan extract and its association with palmitic acid in Tris-egg yolk did not show significant effects on the post-cryopreservation quality of ovine semen.