TOXICIDADE IN VITRO E IN VIVO DO EXTRATO ETANÓLICO DAS VAGENS DE ENTEROLOBIUM CONTORTISILIQUUM EM RATOS

Abstract

RESUMO:

O objetivo deste trabalho foi investigar os componentes fitoquímicos dos extratos etanólico das vagens de E. contortisiliquum (EEtOH-Ec) coletados nos municípios de Monsenhor Gil, Parnaíba e Teresina/Piauí-Brasil, bem como avaliar citotixicidade desses extratos frente a Artemia salina, sua atividade hemolítica, toxicidade aguda e subaguda, ação sobre o ciclo estral e possível ação estrogênica e/ou antiestrogênica em ratas, bem como sua toxicidade sobre o período gestacional e desenvolvimento fetal de ratos. Os frutos foram dessecados, triturados, macerados com etanol PA, filtrados, concentrado em evaporador rotativo e liofilizados. Realizaram-se testes fitoquimicos para detecção dos metabolitos secundários. Foi realizado bioensaio frente Artemia salina nas doses 1, 10, 100 e 1000 μg/mL e analise da atividade hemolítica em placas de agar-sangue e sangue de carneiro nas doses de 1000 μg/mL e 1000, 500, 250 e 125 μg/mL de EEtOH-Ec das três localidades, respectivamente. Para avaliação da toxicidade aguda utilizaram-se 42 ratos tratados por via oral com EEtOH-Ec das três localidades, nas doses de 300 e 2000 mg/Kg. Para a toxicidade subaguda, ciclo estral, ensaio uterotrófico e gestacional, utilizou-se o EEtOH-Ec de Monsenhor Gil, nas doses de 1000, 500 e 250 mg/Kg. Foram utilizadas 24 ratas Wistar tratadas por 45 dias, para avaliação da toxicidade subaguda e ciclo estral. No teste uterotrófico utilizaram-se 54 ratas imaturas, divididas em nove grupos e tratadas com EEtOH-Ec e estradiol do 21º ao 25º dia pós-natal. Para a avaliação da toxicidade gestacional e fetal foram utilizadas 24 ratas e 12 ratos, em cada teste. Na toxicidade gestacional avaliou-se o tempo de prenhez, sexo dos filhotes, número de filhotes vivos e natimortos, peso da ninhada e desenvolvimento da prole. Na toxicidade fetal as ratas foram anestesiadas no 21º dia de gestação e submetidas a cesariana. Realizou-se a contagem do número de fetos e sítios de implantação, pesagem do útero gravídico, fetos e placenta. Examinou-se os fetos quanto à presença de anomalias. Os resultados foram submetidos a ANOVA seguido pelo Teste de Student-Newman-Keuls (p˂0,05). Na análise fitoquímica detectaram-se fenóis, taninos catequicos, flavonas, flavovóis, flavanonas, flavanonóis, triterpenos e saponinas. Os EEtOH-Ec das três localidades apresentaram toxicidade frente a A. salina e hemólise em ambos os testes analisados. Nos ensaios de toxicidade aguda e subaguda, os animais apresentaram mortalidade, diminuição no consumo de ração e no ganho de peso, e alteração nos parâmetros bioquímicos. Não observaram-se alterações sobre o ciclo estral nem ação estrogênica ou antiestrogênica em ratas. Na toxicidade gestacional, na dose de 500 e 1000 mg/kg houve natimortos. Na toxicidade embriofetal não observou-se alteração no numero de fetos e sítios de implantação. Quanto a análise esquelética dos fetos, observou-se um aumento de anomalias nos grupos tratados. Concluiu-se que o EEtOH-Ec apresenta fenóis, taninos catequicos, flavonas, flavovóis, flavanonas, flavanonóis, triterpenos e saponinas. Possui toxicidade frente a A. salina e atividade hemolítica, além de toxicidade aguda e subaguda sobre ratos wistar, pois promoveu morte dos animais e alterações nos parâmetros bioquímicos. Causou fetotoxicidade com morte e alterações esqueléticas nos filhotes das ratas tratadas.

ABSTRACT:

The objective of this work was to investigate the phytochemical components of the ethanolic extracts of E. contortisiliquum (EEtOH-Ec) pods collected in the municipalities of Monsenhor Gil, Parnaíba and Teresina/Piauí-Brazil, as well as to evaluate the cytotoxicity of these extracts against Artemia salina, its hemolytic activity, acute and subacute toxicity, action on the estrous cycle and possible estrogenic and/or antiestrogenic action in rats, as well as its toxicity on the gestational period and fetal development of rats. The fruits were desiccated, crushed, macerated with ethanol PA, filtered, concentrated on a rotary evaporator and lyophilized. Phytochemical tests were performed to detect secondary metabolites. A bioassay was performed against Artemia salina in doses 1, 10, 100 and 1000 μg/mL and analysis of hemolytic activity in blood agar plates and sheep's blood in doses of 1000 μg / mL and 1000, 500, 250 and 125 μg/mL of EEtOH-Ec from the three locations, respectively. For the evaluation of acute toxicity, 42 rats treated orally with EEtOH-Ec from the three locations were used, at doses of 300 and 2000 mg/Kg. For subacute toxicity, estrous cycle, uterotrophic and gestational assays, Monsenhor Gil's EEtOH-Ec was used in doses of 1000, 500 and 250 mg/kg. 24 Wistar rats treated for 45 days were used to assess subacute toxicity and estrous cycle. In the uterotrophic test, 54 immature rats were used, divided into nine groups and treated with EEtOH-Ec and estradiol from the 21st to the 25th postnatal day. For the evaluation of gestational and fetal toxicity, 24 rats and 12 rats were used in each test. In gestational toxicity, pregnancy time, sex of pups, number of live and stillborn puppies, litter weight and development of offspring were evaluated. In fetal toxicity, the rats were anesthetized on the 21st day of pregnancy and underwent cesarean section. Counting the number of fetuses and implantation sites, weighing the pregnant uterus, fetuses and placenta was performed. Fetuses were examined for abnormalities. The results were submitted to ANOVA followed by the Student-Newman- Keuls test (p˂0.05). Phytochemical analysis detected phenols, catechin tannins, flavones, flavovols, flavanones, flavanonols, triterpenes and saponins. The EEtOH-Ec of the three locations showed toxicity against A. salina and hemolysis in both tests analyzed. In acute and subacute toxicity tests, animals showed mortality, decreased feed intake and weight gain, and changes in biochemical parameters. There were no changes in the estrous cycle or estrogenic or antiestrogenic action in rats. In gestational toxicity, at the dose of 500 and 1000 mg/kg there were stillbirths. In embryofetal toxicity, there was no change in the number of fetuses and implantation sites. Regarding the skeletal analysis of the fetuses, an increase in anomalies was observed in the treated groups. It was concluded that EEtOH-Ec presents phenols, catechic tannins, flavones, flavovols, flavanones, flavanonols, triterpenes and saponins. It has toxicity against A. salina and hemolytic activity, in addition to acute and subacute toxicity on wistar rats, as it promoted death of the animals and alterations in the biochemical parameters. It caused fetotoxicity with death and skeletal changes in the pups of the treated rats.