EFEITO DA ADIÇÃO DO EXTRATO DO JAMBOLÃO (Syzygium cumini) AO DILUIDOR TRIS-GEMA SOBRE A VIABILIDADE ESPERMÁTICA DE SÊMEN CAPRINO

Abstract

RESUMO: O processo de criopreservação pode causar danos aos espermatozoides, dessa forma, buscouse um antioxidante de origem vegetal (o extrato de jambolão) que amenizasse os efeitos oxidativos que acontecem nos espermatozoides. A presente pesquisa teve como objetivo avaliar o efeito da adição do extrato de jambolão (Syzygium cumini) ao diluidor TRIS-GEMA sobre a viabilidade espermática pós-descongelação em sêmen caprino da raça Anglo-Nubiana, visto que as espécies reativas ao oxigênio (ROS) podem ser desencadeadas pelo processo de criopreservação (biotécnica reprodutiva). Nos procedimentos deste estudo, os ejaculados foram coletados uma vez por semana, durante 6 semanas, totalizando 48 ejaculados que foram avaliados, diluídos e submetidos ao processo de criopreservação. O sêmen diluído foi envasado em palhetas de 0,25mL, congelado em máquina TK 3000® e armazenado em nitrogênio líquido. Em cada coleta, utilizou-se o pool das amostras, resultado da junção do sêmen de 8 animais da raça Anglo-Nubiana, com idade entre 1,5 e 4 anos (idade reprodutiva), com motilidade total ≥ 80% e vigor ≥ 3. O extrato do jambolão foi adicionado ao diluidor TRISGEMA nas concentrações 1μM, 0,1μM, 0,01μM, 0,001μM, tendo o controle recebido apenas o diluidor citado. Posteriormente, as amostras foram descongeladas para as avaliações de motilidade total e vigor espermático, seguido das demais análises. A microscopia de epifluorescência foi usada para avaliar a integridade acrossomal, a integridade da membrana plasmática e o potencial de membrana mitocondrial. Utilizou-se a microscopia de contraste de fase para avaliar a motilidade total e o vigor espermático no teste de termorresistência (TTR), nos tempos de 0, 60, 120 e 180 minutos. A cinética espermática foi analisada por meio do sistema visual óptico integrado (CASA). As patologias espermáticas e a integridade da membrana espermática foram apreciadas pelo teste hiposmótico (HOST) e estimou-se as substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). Com base nos métodos anteriormente citados, realizou-se as análises estatísticas através do SAS, com as médias sendo obtidas por meio do teste de Duncan a 5% de probabilidade. Por fim, foram obtidos os seguintes resultados: para integridade acrossomal, a concentração de 0,01μM com 93,00% sobressaiu-se como melhor resultado; para membrana mitocondrial, a concentração de 0,1μM com 85,83% apresentou-se como a mais relevante; quanto à integridade de membrana plasmática, a concentração de 0,001μM com 51,00% teve a melhor expressão. Diante dos dados expostos, observou-se não haver diferença estatística significativa, o que leva a concluir que o extrato do jambolão pode ser adicionado ao diluidor TRIS-GEMA.

ABSTRACT: The cryopreservation process can cause damage to sperm, thus sought an antioxidant of plant origin (jambolão extract) that mitigates the oxidative effects that happen on spermatozoa. The present research aimed to evaluate the effect of the addition of jambolão extract (Syzygium cumini) to the TRIS-GEMA thinner on the post-defrosting perchronism in Anglo-Nubian goat semen, as that oxygen-reactive species (ROS) can be triggered by the cryopreservation process (reproductive biotechnique). In the procedures of this study, the ejaculates were collected once a week for 6 weeks, totaling 48 ejaculates that were evaluated, diluted and submitted to the cryopreservation process. The diluted semen was packaged in 0.25mL straws, frozen in a TK 3000® machine and stored in liquid nitrogen. In each collection, the pool of samples was used, resulting from the junction of the semen of 8 Anglo-Nubian animals, aged between 1.5 and 4 years (reproductive age), with total motility ≥ 80% and vigor ≥ 3. The jambolan extract was added to the TRIS-GEMA extender at concentrations 1μM, 0,1μM, 0,01μM, 0,001μM, the control received only the TRIS-GEMA diluter. Subsequently, the samples were thawed for the evaluation of total motility and sperm vigor, followed by the other analyses. Epifluorescence microscopy was used to assess acrosomal integrity, plasma membrane integrity and mitochondrial membrane potential. Phase contrast microscopy was used to assess total motility and spermatic vigor in the heat resistance test (TTR), at 0, 60, 120 and 180 minutes. Sperm kinetics were analyzed using the integrated visual optical system (CASA). Sperm pathologies and sperm membrane integrity were assessed by the hypoosmotic test (HOST) and thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) were estimated. Based on the previously mentioned methods, statistical analyzes were performed using the SAS, with the averages being obtained using Duncan's test at 5% probability. as for the integrity of the plasma membrane, the concentration of 0.001μM with 51.00% had the best expression. In view of the exposed data, it was observed that there was no significant statistical difference that leads to the conclusion that the jambolan extract can be added to the TRIS-GEMA extender.