ENALAPRILATO NA PRODUÇÃO IN VITRO DE EMBRIÕES E GEL DE ENALAPRIL POR VIA INTRAVAGINAL EM BOVINOS

Abstract

RESUMO: O objetivo dessa pesquisa foi estudar alternativas de complexação do enalapril com outras substâncias, visando sua aplicabilidade prática nos protocolos de biotecnologia da reprodução em animais, além de verificar os efeitos do enalaprilato e A-779 na maturação oocitária, fertilização e cultivo de embriões in vitro. No capítulo “Avaliação da dose efetiva do gel de enalapril” em bovinos os animais foram submetidos a uma avaliação clínica previa incluindo a pressão arterial média. As fêmeas escolhidas aleatoriamente receberam por via intravaginal o gel de enalapril nas doses de 0,4 mg/kg, 0,6 mg/kg e 0,8 mg/kg de peso vivo. Em relação ao capítulo “Enalaprilato na produção in vitro de embriões bovinos” Os ovários foram obtidos de abatedouros com inspeção municipal. Os oócitos coletados foram cultivados na ausência (controle) e na presença de enalaprilato nas concentrações: 1 µM, 2 µM e 4 µM. As etapas de aspiração dos folículos antrais, maturação, fertilização e cultivo foram realizados de acordo com a técnica de produção in vitro de embriões já estabelecida. O mesmo procedimento ocorreu no capítulo “Influencia do enalaprilato e do inibidor da angiotensina (1-7) na produção in vitro de embriões bovinos”, porém os oócitos utilizados foram cultivados na ausência e na presença de enalaprilato a 2 µM, A-779 a 2 µM e enalaprilato a 2 µM + A-779 a 2 µM. Os resultados para o experimento de avaliação da dosagem de enalapril para bovinos administrado por via intravaginal utilizando as concentrações 0,4 mg/kg, 0,6 mg/kg e 0,8 mg/kg não apresentaram diferença significativa (p>0,05) na avaliação da variável pressão arterial média, assim como não houve alteração nos níveis de ureia, creatinina, TGO, TGP e aldosterona. Em relação a utilização do enalaprilato nas concentrações 1 µM, 2 µM e 4 µM em todas as fases da produção in vitro de embriões os resultados demostram que não houve diferença significativa (p>0,05) entre os tratamentos para a taxa de clivagem e para a taxa de blastocisto. Para os tratamentos com A-779 a 2 µM Enalaprilato a 2 µM e Enalaprilato a 2 µM + A-779 a 2 µM não apresentaram diferença significativa (p>0,05) na taxa de clivagem e para a taxa de blastocisto. Com relação à qualidade avaliada por meio do número de células da massa celular interna (MCI), número de células do trofoblasto (TE) e a proporção entre MCI e número total de células (TC), verificou-se em relação ao número de células TE e TC que os tratamentos com A-779, enalaprilato e associação entre eles apresentaram maior número de células em relação ao controle. Quando foi analisada a proporção entre MCI e TC observou-se que 100% dos embriões do tratamento Enal a 2 µM +A779 a 2 µM, 65% dos tratados com Enal a 2 µM, 50% dos tratados com A-779 e apenas 33,3% do grupo controle estavam dentro da faixa de 20 a 40% de células da MCI, considerada de melhor qualidade. Conclui-se que o enalaprilato não influenciou na produção in vitro de embriões bovinos, quando avaliados pelas técnicas convencionais, porém quando se avalia pelo número de células embrionárias e a proporção entre elas, os tratamentos com o enalaprilato, A-779 e enalaprilato associado com A-779 apresentaram efeito proliferativo para as células embrionárias, em especial para a massa celular interna, e efeito positivo para a qualidade embrionária avaliada pela proporção de células. Já para o gel de enalapril conclui-se que não houve o efeito do gel nas doses de 0,4, 0,6 e 0,8 mg/kg quando aplicados por via intravaginal. ABSTRACT: The objective of this research was to study alternatives for the complexation of enalapril with other substances, aiming at its practical applicability in animal reproduction biotechnology protocols, in addition to verifying the effects of enalapril and A-779 on oocyte maturation, fertilization and in vitro embryo culture. In the chapter “Assessment of the effective dose of enalapril gel” in cattle, the animals were submitted to a previous clinical evaluation including mean arterial pressure. Females chosen at random received enalapril gel intravaginally at doses of 0.4 mg/kg, 0.6 mg/kg and 0.8 mg/kg of body weight. Regarding the chapter “Enalaprilat in the in vitro production of bovine embryos” The ovaries were obtained from slaughterhouses with municipal inspection. The collected oocytes were cultured in the absence (control) and in the presence of enalaprilat at concentrations: 1 µM, 2 µM and 4 µM. The steps of aspiration of the antral follicles, maturation, fertilization and culture were carried out according to the already established in vitro embryo production technique. The same procedure was performed in the chapter “Influence of enalaprilat and angiotensin inhibitor (1-7) on the in vitro production of bovine embryos”, but the oocytes used were cultured in the absence and presence of 2 µM enalaprilat, A-779 a 2 µM and 2 µM enalaprilat + 2 µM A-779. The results for the experiment evaluating the dosage of enalapril for cattle administered intravaginally using the concentrations 0.4 mg/kg, 0.6 mg/kg and 0.8 mg/kg did not show significant difference (p>0.05) in the evaluation of the mean arterial pressure variable, as well as there was no change in the levels of urea, creatinine, TGO, TGP and aldosterone. Regarding the use of enalaprilat at 1 µM, 2 µM and 4 µM concentrations in all stages of in vitro embryo production, the results show that there was no significant difference (p>0.05) between treatments for the cleavage rate and for blastocyst rate. For the treatments with A-779 at 2 µM Enalaprilat at 2 µM and Enalaprilat at 2 µM + A-779 at 2 µM, there was no significant difference (p>0.05) in the cleavage rate and for the blastocyst rate. Regarding the quality evaluated by means of the number of cells in the inner cell mass (ICM), number of trophoblast cells (TE) and the ratio between ICM and total number of cells (TC), it was verified in relation to the number of cells TE and TC than the treatments with A-779, enalaprilat and association between them showed a higher number of cells in relation to the control. When the proportion between MCI and TC was analyzed, it was observed that 100% of the embryos treated with 2 µM Enal + 2 µM A779, 65% of those treated with 2 µM Enal, 50% of those treated with A-779 and only 33 .3% of the control group were within the range of 20 to 40% of cells of the MCI, considered of better quality. It is concluded that enalaprilat did not influence the in vitro production of bovine embryos, when evaluated by conventional techniques, but when evaluated by the number of embryonic cells and the proportion between them, treatments with enalaprilat, A-779 and enalaprilat associated with A-779 showed a proliferative effect on embryonic cells, especially on the inner cell mass, and a positive effect on embryonic quality assessed by the proportion of cells. As for the enalapril gel, it was concluded that there was no effect of the gel at doses of 0.4, 0.6 and 0.8 mg/kg when applied intravaginally.