GALATO DE ISOPROPILA COMO INIBIDOR DE CISTITE HEMORRÁGICA INDUZIDA POR IFOSFAMIDA EM MODELO EXPERIMENTAL

Abstract

RESUMO: A Cistite hemorrágica é o principal efeito adverso dose-limitante do uso clínico das oxazafosforinas, incluindo a ifosfamida (IFOS). Tal evento ocorre através da formação da acroleína, metabólito responsável pela urotoxicidade desses fármacos, resultando em aumento do estresse oxidativo e produção de citocinas pró-inflamatórias, que culminam na degradação do tecido vesical. Diante disso, identifica-se uma necessidade para o desenvolvimento de um citoprotetor eficaz que possa vir a ser utilizado como adjuvante na terapia oncológica com as oxazafosforinas. Os derivados do acido gálico possuem efeitos antineoplásicos, anti-inflamatórios e antioxidantes, o que pressupõe que o galato de isoproprila (GIP) seja potencialmente útil na pesquisa de novos protótipos que possam mitigar reações inflamatórias agudas induzidas por IFOS. Neste contexto, o objetivo desta pesquisa foi analisar o efeito protetor do GIP frente à cistite hemorrágica induzida por IFOS em modelo animal. O modelo de cistite hemorrágica foi induzido por dose única do antineoplásico IFOS, precedido de pré-tratamento com salina ou GIP (6,25; 12,5; 25; 50 mg/kg, vo) em Mus musculus (CEUA 453/2017). Para analisar a redução do dano foram avaliados a massa úmida vesical (MUV), teor de hemoglobina, o extravasamento do corante azul de Evans na matriz vesical e a Proteina C reativa (PCR) por um método imunoturbidimétrico. As citocinas inflamatórias (TNF- α e IL-1β) foram dosadas por técnica de imunoensaio ELISA. Os dados de inibição foram calculados em relação ao controle negativo (CN) e as significâncias calculadas considerando p<0,05. Os resultados mostram que o pré-tratamento com o GIP (12,5 e 25 mg/kg) reduziu significativamente em 29,73% e 36,86%, respectivamente, a massa úmida vesical e atenuou de forma significativa, a hemorragia (30,1% e 54,55%, respectivamente), houve uma redução de sinais inflamatórios nas bexigas dos animais pre-tratados com GIP 25mg/kg, tanto na analise microscópica quanto macroscópica. O GIP (25 mg/kg) reduziu o significativamente o extravasamento vascular de proteínas (42,94%), os níveis de MDA (32,53%), manteve os níveis de SOD a 89,27%, de forma semelhante ao MESNA (fármaco padrão). Em relação aos níveis de GSH, o GIP 25 mg/kg, manteve o valor à 35,87% em relação ao SHAM , além de diminuir a PCR em 56,41%. Na avaliação de citocinas, o GIP na dose de 25 mg/kg foi capaz de diminuir os níveis de TNF-α (88,77 %) e IL-1β 62,87%). Com base no exposto, pode-se concluir que o GIP foi capaz de atenuar os sinais da cistite hemorrágica induzida por ifosfamida em camundongos e que representa uma promissora opção terapêutica na modulação dessa condição patológica. ABSTRACT: Hemorrhagic cystitis is the main dose-limiting adverse effect of clinical use of oxazaphosphorins, including ifosfamide (IFOS). This event occurs through the formation of acrolein, metabolite responsible for the urotoxicity of these drugs, resulting in increased oxidative stress and production of proinflammatory cytokines, which culminate in the degradation of the bladder tissue. In view of this, a need is identified for the development of an effective cytoprotector that may be used as an adjunct in oncological therapy with oxazaphosphorins. Gallic acid derivatives have antineoplastic, anti-inflammatory and antioxidant effects, which presupposes that isopropyl gallate (IPG) is potentially useful in the search for new prototypes that can mitigate IFOS-induced acute inflammatory reactions. In this context, the objective of this research was to analyze the protective effect of IPG against IFOS-induced hemorrhagic cystitis in an animal model. The hemorrhagic cystitis model was induced by a single dose of IFOS antineoplastic, preceded by saline or IPG pretreatment (6.25; 12.5; 25; 50 mg / kg, vo) in Mus musculus (CEUA 453/2017). In order to analyze the damage reduction, bladder wet mass (BWM), hemoglobin content, Evans blue dye leakage in the bladder matrix and C-reactive protein (CRP) were evaluated by an immunoturbidimetric method. Inflammatory cytokines (TNF-α and IL-1β) were measured by ELISA immunoassay. Inhibition data were calculated in relation to the negative control (NC) and the significance calculated considering p <0.05. Results show that pretreatment with IPG(12.5 and 25 mg / kg) significantly reduced bladder wet mass by 29.73% and 36.86%, respectively, and significantly attenuated bleeding (30,1% and 54.55%, respectively), there was a reduction of inflammatory signs in the bladders of animals pre-treated with IPG 25mg / kg, both in the microscopic and macroscopic analysis. IPG (25 mg / kg) significantly reduced vascular protein extravasation (42.94%), MDA levels (32.53%), maintained SOD levels at 89.27%, similar to MESNA (standard drug). Regarding GSH levels, IPG 25 mg / kg maintained the value at 35.87% compared to SHAM, besides reducing CRP by 56.41%. In the cytokine evaluation, 25 mg / kg IPG was able to decrease the levels of TNF-α (88.77%) and IL-1β 62.87%). Based on the above, it can be concluded that IPG was able to attenuate the signs of ifosfamide-induced hemorrhagic cystitis in mice and represents a promising therapeutic option in modulating this pathological condition.