ANÁLISE DA VIABILIDADE DE OÓCITOS OVINOS APÓS CRIOPRESERVAÇÃO EM MEIO ALTERNATIVO CONTENDO ACP-408®

Abstract

RESUMO: Objetivou-se analisar a viabilidade de oócitos ovinos submetidos a criopreservação lenta em meio alternativo contendo ACP-408® após descongelação. Foram coletados 188 ovários de 94 ovelhas púberes de abatedouros da microrregião de Teresina-PI. Os ovários foram transportados ao laboratório em garrafa térmica contendo solução fisiológica a 37ºC e 30 µg/mL de sulfato de gentamicina. Posteriormente, os folículos foram puncionados para obtenção dos Complexos Cumulus Oócitos (CCOs), com agulha de calibre 21G acoplada a seringa de 5mL. Logo, o aspirado foi depositado em tubos tipo falcon de 15 mL, por um período de 15 minutos para que houvesse decantação dos CCOs. O sedimento foi aspirado através de pipeta e colocadas em placas de Petri, onde foram avaliados e classificados por meio de um estereomicroscópio. Após a classificação, os CCOs foram separados em três grupos: Grupo I (Glicerol/Controle), Grupo II (Etilenoglicol), Grupo III (Etilenoglicol + ACP-408®) e envasados em palhetas de 0,25 mL. Seguidamente foram submetidos a criopreservação lenta, em curva de criopreservação específica para embriões em aparelho TK-3000®. Os oócitos foram descongelados e avaliados através das sondas de iodeto de propídeo e diacetato de carboxifluresceína. Foram recuperados 190 COCs com taxa de recuperação de 2,02 COCs por par de ovários. Na análise de viabilidade com sondas fluorescentes, o grupo contendo etilenoglicol e ACP-408® obteve resultado de 18,51%, enquanto os grupos contendo etilenoglicol e glicerol obtiveram taxas de viabilidade de 12,5% e 9,09%, respectivamente. Portanto, o grupo contendo ACP-408® e etilenoglicol demonstrou uma taxa de viabilidade de oócitos ovinos semelhantes aos crioprotetores padrões comerciais, pós descongelação.

ABSTRACT: The objective of this study was to analyze the viability of ovine oocytes submitted to slow cryopreservation in an alternative medium containing ACP-408® after thawing. 188 ovaries were collected from 94 pubescent sheep from the Teresina-PI micro-region. The ovaries were transported to the laboratory in a thermos flask containing physiological solution at 37ºC and 30μg / mL of gentamicin sulfate. Afterwards, the follicles were punctured to obtain the Cumulus Oocyte Complexes (CCOs), with a 21G gauge needle attached to a 5mL syringe. The aspirate was then placed in 15 mL Falcon tubes for a period of 15 minutes for of the CCOs. The sediment was aspirated through a pipette and placed in Petri dishes, where they were evaluated and classified by means of a stereomicroscope. After classification, the CCOs were separated into three groups: Group I (Glycerol / Control), Group II (Ethylene Glycol), Group III (Ethylene Glycol + ACP-408®) and packed in 0.25 mL vats. Then they were submitted to slow cryopreservation, in a cryopreservation curve specific for embryos in TK-3000® apparatus. The oocytes were thawed and evaluated through propidium iodide probes and carboxyurelscein diacetate. A total of 190 COCs were recovered with a recovery rate of 2.02 COCs per ovarian pair. In the feasibility analysis with fluorescent probes, the group containing ethylene glycol and ACP-408® obtained a result of 18.51%, while the groups containing ethylene glycol and glycerol obtained viability rates of 12.5% and 9.09%, respectively. Therefore, the group containing ACP-408® and ethylene glycol demonstrated a sheep oocyte viability rate similar to standard commercial cryoprotectants after thawing.