EFEITO DA ANGIOTENSINA – (1-7) NA PRODUÇÃO IN VITRO DE EMBRIÕES BOVINOS

Abstract

RESUMO: A produção in vitro (PIV) de embriões é uma técnica que vem se estabelecendo com o objetivo de obter embriões viáveis de fêmeas de alto valor genético. A biotécnica permite o contato entre o espermatozoide e o oócito fora do trato reprodutivo da fêmea, com a formação de um novo indivíduo. No entanto, apesar de ser uma biotécnica versátil e dos esforços realizados, as taxas de sucesso são inferiores àquelas obtidas com embriões produzidos in vivo. Dessa forma, a adição de Angiotensina - (1-7) nos meios de produção in vitro de embriões bovinos foi testada com a finalidade de melhorar a quantidade e qualidade dos embriões produzidos. Foram utilizados o total de 960 oócitos, aspirados de ovários obtidos de fêmeas bovinas abatidas pela Marchantaria Santa Rita e transportados ao Laboratório de Biotecnologia da Reprodução Animal. Sendo que, 480 oócitos foram distribuídos entre quatro tratamentos e seis repetições, cultivados em diferentes concentrações de Ang – (1-7) (Experimento I), sendo elas: G1) Controle; G2) Ang-(1-7) à 1µM; G3) Ang-(1-7) à 2µM e G4) Ang-(1-7) à 4µM. Após o Experimento I, realizou-se o Experimento II, avaliando a influência do antagonista específico da Ang-(1-7), A-779, nos meios de produção, sendo os grupos divididos em: G1) Controle; G2) Ang-(1-7) à 2µM; G3) Ang-(1-7) à 2µM + A-779 à 2µM; G4) A-779 à 2µM. A avaliação da taxa de clivagem foi realizada após 48 horas do início do cultivo e a formação de blastocisto após 168 horas. Para análise dos dados paramétricos foi realizado ANOVA e para os dados não paramétricos, o teste utilizado foi o de Kruskal-Wallys ao nível de 5% de probabilidade. Os resultados foram expressos como média porcentagem. Os dados foram avaliados pelo programa SigmaStat versão 3.5 (Systat Software, Inc). Para avaliação de taxa de clivagem e taxa de blastocisto dos Experimentos I e II, as concentrações testadas de Ang -(1-7) e A-779 não apresentaram resultado significativo quanto a formação de embriões quando comparadas ao grupo controle. Entretanto, quando avaliados individualmente, os grupos apresentam embriões de qualidades diferentes. Conclui-se que a adição de Angiotensina-(1-7) nas concentrações de 1µM, 2µM e 4µM não influenciam na qualidade e nas taxas de clivagem e formação de blastocisto, quando utilizada nos protocolos de Produção in vitro de Embriões Bovinos. ABSTRACT: In vitro production (PIV) of embryos is a technique that has been established with the objective of obtaining viable embryos from females of high genetic value. This Biotechnology allows the contact between the spermatozoa and the oocyte outside the female 's reproductive tract, with the new individual formation. However, despite being a versatile biotechnique and the efforts made, the success rates are lower than those obtained with embryos produced in vivo. Thus, the addition of Angiotensin - (1-7) in the means of in vitro production of bovine embryos was tested in order to improve the quantity and quality of the produced embryos. A total of 960 oocytes were used, aspirated from ovaries obtained from slaughtered bovine females and transported to the Laboratory of Animal Reproduction Biotechnology. 480 oocytes were distributed between four treatments and six repetitions, cultured in different concentrations of Ang - (1-7) (Experiment I), which are: G1) Control; G2) Ang- (1-7) at 1µM; G3) Ang- (1-7) at 2µM and G4) Ang- (1-7) at 4µM. After Experiment I, Experiment II was carried out, evaluating the influence of the Ang- (1-7) specific antagonist, A-779, in the means of production, with the groups divided into: G1) Control; G2) Ang- (1-7) at 2µM; G3) Ang- (1-7) at 2µM + A-779 at 2µM; G4) A-779 at 2µM. The evaluation of the cleavage rate was performed 48 hours after the beginning of the culture, and the formation of a blastocyst after 168 hours. For analysis of parametric data, ANOVA was performed, and for non-parametric data, the test used was the Kruskal-Wallys test at the level of 5% of probability. The results were expressed as an average percentage. The data were evaluated using the SigmaStat version 3.5 program (Systat Software, Inc). For the evaluation of cleavage rate and blastocyst rate in Experiments I and II, the tested concentrations of Ang- (1-7) and A-779 did not shown any significant results regarding the formation of embryos when compared to the control group. However, when evaluated individually, the groups had embryos of different qualities. It is concluded that the addition of Angiotensin- (1-7) in concentrations of 1µM, 2µM and 4µM do not influence the quality and rates of cleavage and blastocyst formation, when used in the protocols of in vitro pr oduction of bovine embryos.