ATIVIDADE ANTICOAGULANTE E ANTIAGREGANTE DO ÓLEO ESSENCIAL DE Rosmarinus officinalis L. E AÇÃO VASORRELAXANTE DO MONOTERPENO γ-TERPINENO EM ARTÉRIA MESENTÉRICA DE RATOS

Abstract

RESUMO: Rosmarinus officinalis L. (alecrim) é uma planta medicinal, da família Lamiaceae, cujo óleo essêncial, extraído de suas folhas, é um líquido aromático com ação antioxidante que tem entre seus constituintes os monoterpenos 1-8 cienol, limoneno e γ-terpineno. O objetivo deste estudo foi avaliar o potencial anticoagulante e antiagregante do óleo essencial de Rosmarinus officinalis L. (OERO) livre e complexado a β-ciclodextrina (β-CD) e do seu constituinte γ- terpineno, além de analisar o efeito do γ-terpineno sobre a reatividade vascular em artéria mesentérica superior isolada de rato. A avaliação do efeito anticoagulante foi realizada pelos testes, Tempo de Protrombina (TAP) e Tempo de Tromboplastina Parcialmente Ativada (TTPA), após tratamento, por via oral, durante 7 dias com OERO livre (OERO), OERO complexado em β-CD (OERO+βCD) ou γ-terpineno (100 mg/kg). Todos os protocolos foram aprovados pelo CEUA Nº 275⁄16. Os resultados demonstraram um aumento significativo do TAP nos grupos OERO, OERO+βCD, e γ-terpineno quando comparados ao grupo controle. Efeito do OERO na agregação plaquetária foi realizada por dois protocolos diferentes. No primeiro, o OERO (100 µM), foi adicionado diretamente, na cubeta, ao plasma de animais não tratados e reduziu a agregação plaquetária induzida por ADP. No segundo protocolo, os animais tratados por via oral, durante 7 dias, com OERO ou OERO+βCD (100 mg/kg), não apresentaram diferença na agregação induzida por ADP. Para verificar a segurança na utilização do OERO foram realizados o teste de MTT (citotoxicidade), dosagem de parâmetros bioquímicos e análise histológica (coloração H&E) de ratos tratados, por via oral, durante 7 dias com OERO ou OERO+βCD (100 mg/kg). No teste de MTT, concentrações de 200, 400 e 800 μg/mL apresentaram redução da viabilidade celular e avaliando a CC50, as amostras foram consideradas atóxicas. Houve uma redução significativa de colesterol, glicose e ALT no grupo OERO+βCD quando comparado ao grupo controle. Análise histopatológica não demonstrou lesão significativa nos tecidos hepático e renal. A reatividade vascular foi avaliada em anéis de artéria mesentérica superior e os resultados demonstraram que o γ-terpineno promoveu efeito vasorrelaxante, independente do endotélio vascular sobre contrações induzidas por fenilefrina. A pré-incubação com diferentes concentrações de γ- terpineno não atenuou as contrações induzidas por adição cumulativa de fenilefrina, mas observou-se uma atenuação do efeito vasorrelaxante do γ- terpineno na presença do bloqueador inespecífico de canais de potássio (TEA 3mM). Conclui-se que OERO, OERO+βCD e γ-terpineno demonstraram efeito anticoagulante e OERO apresentou efeito antiagregante; OERO e OERO+βCD não apresentaram toxicidade e reduziram os valores de colesterol, glicose e ALT; e o γ-terpineno apresentou efeito vasorrelaxante provavelmente por mecanismos envolvendo a participação dos canais de potássio. ABSTRACT: Rosmarinus officinalis L. (Rosemary) is a medicinal plant, of the Lamiaceae family, whose essential oil, extracted from its leaves, is an aromatic liquid with antioxidant action that has among its constituents the monoterpenes 1-8 cyenol, limonene and γ-terpinene. The objective of this study was to evaluate the anticoagulant and anti-aggregation potential of free Rosmarinus officinalis L. essential oil (OERO) and complexed Rosmarinus officinalis L. essential oil to β- cyclodextrin (β-CD) and its constituent γ-terpinene, besides analyzing the effect of γ-terpinene on vascular reactivity in isolated rat superior mesenteric artery. The evaluation of the anticoagulant effect was performed by the following tests, Prothrombin Time (PT) and Activated partially Thromboplastin Time (APTT), after oral treatment with free OERO (OERO), complexed OERO (OERO+βCD) or γ- terpinene (100 mg/kg) for 7 days. All protocols were approved by CEUA/UFPI No 275⁄16. Results demonstrated a significant increase in PT in the OERO, OERO+βCD, and γ-terpinene groups when compared to the control group. The effect of the OERO on platelet aggregation was achieved by two different protocols. In the first, OERO (100 µM) was added directly into the cube, containing the plasma of untreated animals and reduced platelet aggregation induced by ADP. In the second protocol, animals treated orally for 7 days with OERO or OERO+βCD (100 mg/kg) showed no difference in platelet aggregation induced by ADP. To check the safety of using the OERO, MTT test (cytotoxicity), dosage of biochemical parameters and histological analysis (H&E) of rats treated orally with OERO or OERO+βCD (100 mg/kg) for 7 days. In the MTT test, concentrations of 200, 400 and 800 μg/mL showed reduced cell viability and assessing the CC50, the samples were considered non-toxic. There was a statistically significant reduction in cholesterol, glucose and ALT in the OERO+βCD group when compared to the control group. Histopathological analysis showed no significant injury in liver and kidney tissues. Vascular reactivity was evaluated in superior mesenteric artery rings and the results demonstrated that γ-terpinene promoted an independent vasorelaxing effect of the vascular endothelium on phenylephrine-induced contractions. Pre-incubation with different concentrations of γ-terpinene did not attenuate the contractions induced by cumulative addition of phenylephrine, but there was an attenuation of the vasorelaxing effect of γ-terpinene in the presence of the non-specific potassium channel blocker (TEA 3mM). It was concluded that OERO, OERO+βCD and γ-terpinene demonstrated an anticoagulant effect and OERO showed an anti-aggregation effect; OERO and OERO+βCD showed no toxicity and reduced cholesterol, glucose and ALT values; and γ-terpinene displayed a vasorelaxing effect probably due to mechanisms involving the participation of potassium channels.