CONTRIBUIÇÃO AO CONHECIMENTO QUÍMICO E BIOLÓGICO DAS FOLHAS DE Combretum mellifluum Eichler.

Abstract

RESUMO:Combretum mellifluum Eichler (Combretaceae) é uma espécie não endêmica do cerrado brasileiro, conhecida popularmente como cipó, cipó vermelho e sipaúba. O presente trabalho relata os constituintes químicos isolados e identificados no extrato etanólico (EEtOH) das folhas desta espécie. Adicionalmente, foi avaliado o potencial antioxidante, anticolinesterásico e antileishmania do extrato e frações. O extrato etanólico das folhas foi submetido à partição fornecendo as frações hexânica (FHex), acetato de etila (FAcOEt), aquosa (FAqu), precipitado (Fppt) e sobrenadante (FSbn). As frações FSbn e FHex foram submetidas a métodos cromatográficos clássicos em colunas de gel de sílica, C18 e Sephadex LH-20. O fracionamento de FSbn resultou no isolamento dos triterpenoides lup-20(29)-en-2α,3β-diol (1) e duas misturas epiméricas de quatro novos triterpenoides do tipo cicloartano 2a+2b e 2a+2b+3a+3b, elucidados como quadrangularato M de metila (2a), 24-epiquadrangularato M de metila (2b), 2α,3β,24β-trihidroxi-cicloart-25-eno de metila (3a) e 2α,3β,24α-trihidroxi-cicloart-25-eno (3b). Os compostos obtidos a partir da fração FHex foram a lupenona (4) e uma mistura de seis esteroides, identificados como derivados sililados: colesterol (5), campesterol (6), estigmasterol (7), Δ22-estigmastenol (8), sitosterol (9) e sitostanol (10). As estruturas dos compostos isolados foram identificadas e/ou elucidadas por métodos espectroscópicos de RMN 1H e 13C uni e bidimensionais, CG-EM, EMAR e comparação com dados relatados na literatura. O composto 1 está sendo relatado pela primeira vez na família Combretaceae e os epímeros 2a/2b e 3a/3b são inéditos na literatura. No ensaio de sequestro do radical DPPH as frações FAcOEt e FAqu apresentaram os maiores potenciais antioxidantes, com CE50 de 89,54±3,74 μg mL-1 e 107,57±5,31 μg mL-1, respectivamente, correlacionando-se positivamente com o conteúdo de flavonoides totais (432,658,37 e 209,19±0,74 mg ER g-1 de amostra). As frações FAcOEt, FSbn e EEtOH apresentaram indicativo de inibição da enzima acetilcolinesterase. EEtOH, FAqu, FHex, FSbn, 1 e 2a+2b inibiram o crescimento de Leishmania amazonensis. A mistura dos compostos 2a+2b apresentou percentual de inibição do crescimento de 95% e 100% nas concentrações de 400 e 800 μg mL-1, respectivamente, com CI50 de 83,07 μg mL-1. Os resultados obtidos contribuem para o conhecimento da composição química e do potencial biológico da espécie C. mellifluum.

ABSTRACT:Combretum mellifluum Eichler (Combretaceae) is a non-endemic species of Brazilian Cerrado, commonly known as cipó, red cipó and sipaúba. This study reports the isolated and identified chemicals constituents of ethanolic extract (EEtOH) from this plant’s leaves. In addition, it was evaluated the antioxidant, anticholinesterase and antileishmanial potential of the extract and fractions. The ethanolic extract from the leaves was submitted to partition providing hexane fraction (FHex), ethyl acetate fraction (FAcOEt), aqueous fraction (FAqu), precipitate fraction (Fppt) and supernatant (FSbn). The fractions FSbn and FHex were submitted to classical chromatographic methods in silica gel column, C18 and Sephadex LH-20. The FSbn fractioning resulted in isolation of triterpenoid lup-20(29)-en-2α,3β-diol (1) and two epimeric mixtures of four new cycloartane triterpenoids Methyl quadrangularate and Methyl 24-epiquadrangularate (2a+2b) and 2α,3β,24β-trihidroxi-cycloart-25-ene of methyl and 2α,3β,24α-trihidroxi-cycloart-25-ene (3a+3b). The obtained compounds from the FHex fraction were lupenone (4) and a mixture of six steroids, identified as silanated derived: cholesterol (5), campesterol (6), stigmasterol (7), Δ22-stigmastenol (8), sitosterol (9) and sitostanol (10). The structures of the isolated compounds were identified and/or elucidated by spectroscopic methods of RMN 1H and 13C single and two-dimensional, CG-EM, HRESI-MS, and comparison with data reported in literature. The compound 1 is being reported for the first time in Combretaceae family. In the DPPH radical scavenging assay, the FAcOEt and FAqu fractions presented the greatest antioxidant potentials, with CE50 of 89,54±3,74 μg mL-1 and 107,57±5,31 μg mL-1, respectively, positively correlating with the content of total flavonoids (432,658,37 and 209,19±0,74 mg RE g-1 of sample). The FAcOEt, FSbn and EEtOH fractions presented indication of acetylcholinesterase enzyme inhibition. The inhibitors EEtOH, FAqu, FHex, FSbn, 1 and 2a+2b suppressed Leishmania amazonensis development. The mixture of compounds 2a+2b were efficient in inhibiting the Leishmania amazonensis growth percentage of 95% and 100% on concentrations of 400 and 800 μg mL-1, respectively, with CI50 of 83,07 μg mL-1. The obtained results contribute for the knowledge of chemical composition and biological potential of C. mellifluum species.