EFEITO PROTETOR DA EPIISOPILOTURINA NO MODELO EXPERIMENTAL DE MUCOSITE INTESTINAL INDUZIDA POR 5-FLUOROURACIL EM CAMUNDONGOS: PAPEL DA VIA NO/COX

Abstract

RESUMO:A mucosite intestinal (MI) é um efeito colateral do quimioterápico 5- Fluorouracil (5- FU), que ainda não possui tratamento efetivo, de modo que os produtos de origem natural têm sido amplamente pesquisados como proposta terapêutica para essa patologia. A Epiisopiloturina (EPI) é um alcaloide derivado da Pilocarpus microphyllus Stapf ex Wardleworth, que apresenta potencial antinociceptivo, antihelmíntico, antioxidante, anti-inflamatório. Assim, sendo a MI uma condição patológica caracterizada pela inflamação e a EPI um composto potencialmente antiinflamatório, objetivou-se no presente estudo avaliar o efeito da EPI na MI induzida por 5-FU. Inicialmente, realizou-se o protocolo OECD para a avaliação toxicológica. Os animais receberam doses elevadas de EPI via oral e em seguida foram observados durante 14 dias e avaliados quanto ao número de leucócitos circulantes, a variação ponderal, ingestão de ração, água e peso relativo dos ógãos (rins, fígado, baço, coração e testículo). Posteriormente, investigou-se o efeito da EPI na MI, os animais foram submetidos à indução da MI por meio da administração do 5-FU (450 mg/kg) via intraperitoneal (i.p), e tratados com EPI i.p, por quatro dias. Após a eutanásia realizou-se a remoção do duodeno, jejuno e íleo para avaliação do efeito da EPI na mucosite, através dos parâmetros de variação ponderal, número de leucócitos circulantes, análise histopatológica, morfométrica e avaliação do número de mastócitos. Após essa fase selecionou-se a dose de 10 mg/kg e o segmento jejuno para a execução do mesmo protocolo, porém com o uso do inibidor seletivo de COX-2 (Celecoxibe). Avaliou-se então a dosagem de Malondialdeido (MDA), o número de células caliciformes, além do envolvimento da COX- 2 na MI por meio de imunohistoquímica. Por fim, foi realizada a modulação do óxido nítrico (NO) na MI com L-NAME e L-arginina, o envolvimento do NO foi avaliado por imunohistoquímica para iNOS e Docking molecular. Verificou-se que os animais tratados com EPI não apresentaram sinais clínicos de toxicidade, nem alterações no número de leucócitos circulantes e peso relativo dos órgãos. Observou-se ainda que na MI a EPI não atenuou a perda de peso, porém foi capaz de prevenir as alterações morfométricas, histopatológicas e a leucopenia, preveniu o aumento do número de mastócitos, reduzir a dosagem de MDA e preservou as células caliciformes, bem como diminuiu de forma estatisticamente significante a área imunomarcada para COX-2 e iNOS, associada à forte interação molecular da EPI com a iNOS. Diante disso, constatouse que a EPI é pouco tóxica e que apresentou efeito protetor na mucosite intestinal induzida por 5-FU, reduzindo parâmetros inflamatórios e oxidativos com participação da via COX-2 e NO.

ABSTRACT:Intestinal mucositis (MI) is a side effect of the chemotherapy 5-Fluorouracil (5-FU), which does not yet have effective treatment, so that products of natural origin have been widely researched as a therapeutic proposal for this pathology. Epiisopiloturin (EPI) is an alkaloid derived from Pilocarpus microphyllus Stapf ex Wardleworth, which has antinociceptive, anthelmintic, antioxidant, anti-inflammatory potential. Thus, since MI is a pathological condition characterized by inflammation and PPE is a potentially anti-inflammatory compound, the objective of this study was to evaluate the effect of EPI on IM induced by 5-FU. Initially, the OECD protocol for the toxicological evaluation. The animals received high doses of EPI orally and then were observed for 14 days and evaluated for the number of circulating leukocytes, weight variation, feed intake, water and relative weight of the organs (kidneys, liver, spleen, heart and testis ). Subsequently, the effect of EPI on MI was investigated, animals were submitted to MI induction by intraperitoneal (i.p) administration of 5-FU (450 mg / kg) and treated with i.p. EPI for four days. After euthanasia, the duodenum, jejunum and ileum were removed to evaluate the effect of EPI on mucositis, through the parameters of weight variation, number of circulating leukocytes, histopathological analysis, morphometric analysis and mast cell count. After this phase the dose of 10 mg / kg and the jejunum segment were selected for the execution of the same protocol, but with the use of the selective COX-2 inhibitor (Celecoxib).The dosage of Malondialdehyde (MDA), the number of goblet cells, and the involvement of COX-2 in IM were evaluated by immunohistochemistry. Finally, modulation of nitric oxide (NO) in MI with L-NAME and L-arginine was performed, the involvement of NO was evaluated by immunohistochemistry for iNOS and molecular docking. It was found that the animals treated with EPI had no clinical signs of toxicity or changes in the number of circulating leukocytes and relative body weight. It was also observed that in IM, PPE did not attenuate weight loss, but was able to prevent morphometric, histopathological and leucopenia changes, prevented the increase of mast cells, reduce MDA dosage and preserved goblet cells as well as a statistically significant decrease in the immunolabelled area for COX-2 and iNOS, associated with the strong molecular interaction of EPI with iNOS. In view of this, it was verified that EPI is not very toxic and showed a protective effect on intestinal mucositis induced by 5- FU, reducing inflammatory and oxidative parameters with COX-2 and NO pathway.