EFEITO ANTI-INFLAMATÓRIO, ANTIOXIDANTE E ANTIPIRÉTICO, DO VANILATO DE ISOPROPILA, UM DERIVADO SEMISSINTETICO DO ÁCIDO VANÍLICO

Abstract

RESUMO:Inflamação é um mecanismo de defesa do corpo à lesão tecidual e ocorre como uma resposta defensiva, que desencadeia profundas adaptações fisiológicas numa tentativa de limitar os danos no tecido e remover o agente patogênico. Os fármacos comumente utilizados no tratamento de condições inflamatórias estão associados ao aparecimento de efeitos adversos graves como úlceras gastrointestinais, hemorragias e distúrbios renais, efeitos cardiovasculares e trombose. Os produtos naturais e seus derivados são muito utilizados para o tratamento de diversas patologias, dentre elas para o alívio da dor e inflamação, um desses derivados naturais ,o ácido vanilico, demonstrou possuir efeitos anti-inflamatórios e antioxidantes onde atua diminuindo o recrutamento neutrofílico e o estresse oxidativo. Diante disso, o composto vanilato de Isopropila (ISP-VT) foi fomulado a partir da estrutura química do ácido vanílico. O objetivo do presente trabalho foi investigar a atividade anti-inflamatória, antioxidante e antipirética e potencial tóxico do ISP-VT . A atividade anti-inflamatória do ISP-VT foi avaliada pela medição de edema de pata induzido por diferentes agentes inflamatórios, análise de imuno-histoquímica e ensaio de inibição de Ciclooxigenases-1 e Ciclooxigenase-2 (COXs), além de avaliação da atividade antipirética no modelo de febre por levedura. No modelo de peritonite, foi analisada a permeabilidade, contagem total e diferencial de leucócitos, a atividade da enzima mieloperoxidase (MPO), a migração celular com o uso de microscopia intra-vital, os níveis de citocinas fator de necrose tumoral-alfa (TNF-α),os níveis de interleucina-6 (IL-6), A atividade antioxidante foi realizada com testes in vitro, e ex vivo por análise de concentrações de malondialdeído (MDA), as concentrações de nitrito (NO), os níveis da glutationa (GSH) e superóxido dismutase (SOD). Além disso, também foram avaliadas a toxicidade gástrica e toxicidade aguda do ISP-VT. Como resultados, o pré-tratamento com ISP-VT reduziu significativamente (P < 0,05) o edema da pata induzido pela carragenina, sulfato de dextrana (DEX), composto 48/80, serotonina (5-HT), histamina (HIST), bradicinina (BK), e prostaglandina E2 (PGE2). Além disso, também inibiu o recrutamento de leucócitos e neutrófilos; diminuindo sua a adesão e rolamento, reduziu a atividade da enzima MPO, reduziu os níveis de TNF-α e IL-6, a permeabilidade vascular. ISP-VT, também foi efetivo em reduzir a imumomarcação de células para a COX-2 no tecido da pata, e exibiu uma maior inibição para isoforma da enzima COX-2. Além isso foi efetivo em diminuir as concentrações de MDA e de nitrito, e manteve os níveis de GSH e SOD no exsudado peritoneal, além da atividade no sequestro de radicais in vitro. ISP-VT foi efetivo ao reduzir a febre causada por levedura. ISP-VT (100 mg/kg), diminuiu a lesão gástrica e atividade de MPO quando comparado ao grupo tratado com Indometacina (20 mg/kg). Nos testes de toxicidade o ISP-VT não apresentou toxicidade em camundongos na dose mais alta testada e nenhuma alteração comportamental ou clínica foi observada. Em conclusão, estes dados mostram que ISP-VT reduz a resposta inflamatória através da inibição de eventos vasculares e celulares, por modular a migração de neutrófilos, pela inibição da produção de citocinas pró-inflamatórias, redução da febre e por reduzir o estresse oxidativo, e que seu mecanismo principal é por atuar inibindo principalmente a COX-2.

ABSTRACT:Inflammation is a defense mechanism of the body to tissue injury and occurs as a defensive response, which triggers profound physiological adaptations in an attempt to limit tissue damage and remove the pathogen. Drugs commonly used in the treatment of inflammatory conditions are associated with the appearance of serious adverse effects such as gastrointestinal ulcers, bleeding and renal disorders, cardiovascular effects and thrombosis. Natural products and their derivatives are widely used for the treatment of several pathologies, among them for the relief of pain and inflammation, one of these natural derivatives, vanillic acid, has been shown to have anti-inflammatory and antioxidant effects where it works by reducing neutrophil recruitment and the oxidative stress. In view of this, the isopropyl vanillate compound (ISP-VT) was synthesized from the chemical structure of vanillic acid. The objective of the present work was to investigate the anti-inflammatory, antioxidant and antipyretic activity of ISP-VT in mice and to evaluate their toxicity. The anti-inflammatory activity of the ISP-VT was evaluated by the measurement of paw edema induced by different inflammatory agents, immunohistochemical analysis and inhibition test of Cyclooxygenase-1 and Cyclooxygenase-2 (COXs), as well as evaluation of antipyretic activity in the yeast fever model. In the peritonitis model,was analyzed total and differential leukocyte count, myeloperoxidase enzyme activity (MPO), cell migration with the use of intra-vital microscopy, tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) cytokines, interleukin-6 (IL-6) levels, malondialdehyde (MDA) concentrations, concentrations levels of glutathione (GSH) and superoxide dismutase (SOD). In addition, vascular permeability and gastric toxicity and acute toxicity of ISP-VT were also evaluated. All in vivo tests were performed on Swiss mice. As a result, pre-treatment with ISP-VT significantly reduced (p <0.05) carrageenan-induced paw edema, dextran sulfate (DEX), compound 48/80, serotonin (5-HT), histamine (HIST ), bradykinin (BK), and prostaglandin E2 (PGE2). In addition, it also inhibited the recruitment of leukocytes and neutrophils; decreasing adhesion and rolling, reduced MPO enzyme activity, reduced TNF-α and IL-6 levels, vascular permeability, MDA and nitrite concentrations, and maintained GSH and SOD levels in the peritoneal exudate, in addition to in vitro radical sequestration activity. ISP-VT, was also effective in reducing COX-2 cell immunostaining in paw tissue, and exhibited a greater inhibition for the COX-2 enzyme isoform. ISP-VT was effective in reducing fever caused by brewer's yeast. ISP-VT (100 mg / kg), decreased gastric injury and MPO activity when compared to the indomethacin-treated group (20 mg / kg). In the toxicity tests the ISP-VT showed no toxicity in mice at the highest dose tested and no behavioral or clinical changes were observed. In conclusion, these data show that ISP-VT reduces the inflammatory response by inhibiting vascular and cellular events, by modulating neutrophil migration, by inhibiting the production of pro-inflammatory cytokines, reducing fever and by reducing oxidative stress, and that its main mechanism is by acting primarily by inhibiting COX-2.