AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTINOCICEPTIVA DO α-FELANDRENO EM MODELO EXPERIMENTAL DE HIPERNOCICEPÇÃO ONCOLÓGICA

Abstract

RESUMO:A dor oncológica é um tipo de dor que ostenta uma neurobiologia enigmática e multifatorial. Por causa da natureza complexa e etiologia da dor do câncer, diversos agentes farmacêuticos são usados como parte do regime de tratamento desse tipo de dor. Nesse contexto, a pesquisa farmacológica para o desenvolvimento de novos agentes terapêuticos vem se tornando cada vez mais necessário. Os óleos essenciais (OE), em especial, os metabólitos secundários, como monoterpenos, são extraídos de plantas, que apresentam as mais variadas características biológicas, dentre eles ressaltamos o α-Felandreno (α-Fel) que, na literatura, destacou-se por apresentar importantes atividades biológicas, como aumentar efetivamente a imunidade através de modulação de resposta imune celular e humoral em animais, atividade antimicrobiana, antitumoral, anti-inflamatório, e antinociceptivo. O objetivo desse estudo foi investigar o possível efeito antinociceptivo do α-Fel em modelo animal de dor oncológica. Para indução da dor oncológica, foi inoculado células de sarcoma-180 na região subaxilar. Os animais foram avaliados quanto aos parâmetros de alodinia e hiperalgesia mecânicas, utilizando os filamentos von Frey. As avaliações antinociceptivas foram divididas em 3 tratamentos: cotratamento – 7 grupos: sham (NaCl 0,9% sem inoculação de células), veículo (NaCl 0,9% com Tween 80 a 2% v.o), controle positivo para avaliação da nocicepção (Pregabalina 10 mg/kg, v.o), controle positivo para avaliação de atividade antitumoral (5-Fluoracil - 5-FU, 25 mg/Kg, i.p) e 3 doses de α-Fel (12,5; 25 e 50 mg/kg v.o), no qual teve início 24 h após a inoculação. Tratamento agudo, no 8° dia pós-inoculação do tumor nos tempos (0, 60, 120, 180 e 240 min) e subagudo 16° ao 24° dia, nos seguintes grupos: sham (NaCl 0,9% sem inoculação de células), veículo (NaCl 0,9% com Tween 80 a 2% v.o), controle positivo para avaliação da nocicepção (Morfina 10 mg/kg, v.o), e 4 doses de α-Fel (6,25; 12,5; 25 e 50 mg/kg v.o), em que nas avaliações direta no tecido peritumoral e indireta na pata traseira direita, o α-Fel capaz de diminuir a hipernocicepção provocada pelo tumor de S-180. Em seguida, foi investigado peso relativo dos órgãos dos animais no cotratamento e pós-tratamento subagudo, bem como o peso bruto dos tumores para investigar possível atividade antitumoral, no qual o α-Fel reduziu em até 74,6% o tamanho do tumor no cotratamento e em até 82,74% no pós-tratamento subagudo. Nesse contexto, para determinar possíveis mecanismos de ação, foram realizados testes para determinação antioxidante, superóxido dismutase (SOD), malondealdeido (MDA) e glutationa redutase (GSH), no qual o α-Fel aumentou a concentração de espécies reativas de ácido tiobarbitúrico (TBARS) e GSH. Posteriormente, verificou-se a participação do α-Fel na via GABAérgica e opióide através de bloqueador específico (Bicuculina e naloxona), que foram capazes de reverter o efeito antinociceptivo do α-Fel, sugerindo participação nessas duas vias, corroborando com a docagem molecular dos receptores opioides (μ, δ, Κ), no qual foi possível observar a ligação do α-Fel nos receptores opióides. E por fim, verificou-se a capacidade do α-Fel em modular citocinas, através de ensaio imunoenzimático (ELISA), no qual observou-se que o α-Fel reduziu os níveis de TNF- α, IL-1β, IL-4 e IL-6. ABSTRACT:Oncologic pain is a type of pain that has an enigmatic and multifactorial neurobiology. Because of the complex nature and etiology of cancer pain, various pharmaceutical agents are used as part of the regimen for treating this type of pain. In this context, pharmacological research for the development of new therapeutic agents has become increasingly necessary. Essential oils (OE), especially the secondary metabolites, such as monoterpenes, are extracted from plants that exhibit the most varied biological characteristics, among them we highlighted α-Felandreno (α-Fel) which displayed important biological activities such as; increase effective immunity by modulating cellular and humoral immune responses in animals, antimicrobial activity, antitumor, anti-inflammatory, and antinociceptive. The Purpose of this study was to investigate a possible antinociceptive effect of α-Fel in animal model of cancer pain. Cancer pain was induced by inoculating sarcoma-180 cells into the subaxillary region of animals. The animals were evaluated for mechanical allodynia and hyperalgesia using von Frey filaments. Antinociceptive evaluations were conducted regarding three treatments (cotreatment: 7 groups: sham NaCl 0.9% without cell inoculation), vehicle (0.9% NaCl with 2% Tween 80), positive control for nociception evaluation (Pregabalin 10 mg / kg, po), positive control for evaluation of antitumor activity ( 5-Fluoracil-5-FU, 25 mg / kg, ip) and 3 doses of α-Fel (12.5, 25 and 50 mg / kg) 24 h after inoculation), Acute treatment on 8th day post-inoculation of the tumor at the times (0, 60, 120, 180 and 240 min) and subacute on the16th to 24th day in the following sham groups (NaCl 0.9% without inoculation of cells), vehicle (NaCl 0,9% com Tween 80 a 2% po) positive control for nociception evaluation (Morphine 10 mg / kg, po), and 4 doses of α-Fel (6.25, 12.5, 25 and 50 mg / kg, kg po),in which α-Fel was capable of decreasing the hypernociception caused by the S-180 tumor in direct evaluations of peritumoral tissue and indirect evaluation of animal right hind paw. The relative weight of organs of animal which underwent cotreatment and subacute treatment as well as the gross weight of tumors was evaluated to investigate possible antitumor activity where α-Fel reduced up to 74.6% of tumor size during cotreatment and up to 82.74% during subacute treatment. In this context to determine possible mechanism of action, levels of antioxidant superoxide dismutase (SOD), malondealdehyde (MDA) and glutathione reductase (GSH) were measured, in which α-Fel increased the concentration of reactive thiobarbituric acid (TBARS) and GSH species. Nextly,the participation of α-Fel in the GABAergic and opioid neural pathways was verified using a specific blocker (Bicuculline and naloxone), which reversed the antinociceptive effect of α-Fel, suggesting its participation in these two pathways corroborating the molecular docking of opioid receptors (μ, δ, Κ), in which it was possible to observe α-Fel binding at the opioid receptors. Finally, the ability of α-Fel to modulate cytokines was verified using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and it was observed that α-Fel reduced levels of TNF-α, IL-1β, IL-4 and IL-6.