IDENTIFICAÇÃO FILOGENÉTICA DO COMPLEXO RHIZOCTONIA SOLANI EM COENTRO

Abstract

RESUMO:O coentro (Coriandrum sativum) é uma planta herbácea que pertence à família Apiaceae. É classificada como hortaliça folhosa e aromática. Possui centro de origem no sul da Europa e Oriente Médio. Rússia e Índia são os maiores produtores mundiais. Esta olerícola apresenta importância para a culinária devido ao uso de suas folhas em temperos. Existem alguns problemas fitossanitários de maior relevância, entre eles estão os patógenos que causam problemas no sistema radicular, como Fusarium, Rhizoctonia sp. e Macrophomina phaseolina. A ocorrência de sintomas de podridão radicular e tombamento em plantas de coentro já foram relatados em trabalhos no Brasil, no entanto, a identificação dos fitopatógenos foi realizada apenas com avaliação dos caracteres morfológicos. Desta forma, este estudo teve como objetivos: 1. Identificar quais são os agentes que causam tombamento e podridão radicular em coentro, através de abordagem morfológica e análise molecular. 2. confirmar se os fungos identificados causam tombamento. Amostras de plantas sintomáticas foram coletadas nos estados do Ceará, Piauí e Distrito Federal nos anos de 2016 e 2017. Foram obtidos 13 isolados de fungos de plantas sintomáticas. Inicialmente, os isolados foram cultivados em meio de cultura Batata Dextrose Ágar (BDA) e Aveia Agar (A.A.). As culturas em ambos os meios de cultura apresentaram, inicialmente, crescimento branco, tornando marrom ao 20º dia. Todos os isolados produziram microesclerodios, no entanto em meio de cultura Aveia ágar a produção foi maior em relação ao meio de cultura BDA. Posteriormente, foi realizada a técnica de coloração de núcleos com marcador fluorescente DAPI e a contagem de núcleo por hifa em microscópio de fluorescência. Dez isolados apresentaram hifas multinucleadas e três, hifas binucleadas, indicando que estes pertenciam a gêneros semelhantes a R. solani. Na análise filogenética seis isolados multinucleados agruparam com isolados de referências do grupo de anastomose AG4 HGI, dois agruparam com isolado de referencia AG2-2 e 2 isolados não agruparam com nenhum grupo de anastomose já descrito. Os isolados binucleados, dois agruparam com Waitea circinata e um isolado agrupou com Ceratobasidium ramicola. No teste de patogenicidade confirmou-se que todos os 13 fungos inoculados causaram tombamento em plântulas, e que isolados de R. solani, Ceratobasidium e Waitea, não apresentaram diferenças significativas nos níveis de agressividade. Este é o primeiro registro de R. solani AG2-2 e AG4-HGI, Waitea sp e Ceratobasidium ramicola em coentro no Brasil. Além disso, neste estudo foi identificado uma nova linhagem filogenética do complexo R. solani. ABSTRACT:Coriander (Coriandrum sativum) is a herbaceous plant that belongs to the Apiaceae family. It is classified as a leafy and aromatic edible plant. Its center of origin is in southern Europe and the Middle East. Russia and India are the world’s main producers. This edible plant is of culinary importance, due to the use of its leaves for seasoning. Among the phytosanitary problems, the most significant are the pathogens that cause problems to the root system, such as Fusarium, Rhizoctonia sp. and Macrophomina phaseolina. The occurrence of root rot symptoms and collapse in coriander plants has already been reported in studies in Brazil, but the plant pathogens were only identified by the evaluation of morphological characters. Thus, this study had the objectives of: 1. identifying which agents cause collapse and root rot in coriander, by means of a morphological approach and molecular analysis; 2. confirming if the identified fungi cause collapse. Samples of symptomatic plants were collected in the states of Ceará, Piauí and the Federal District in the years 2016 and 2017. Thirteen fungal isolates were obtained from symptomatic plants. Initially, the isolates were cultivated in Potato Dextrose Agar (PDA) and Oatmeal Agar (OA). The cultures in both media showed white growth at first, turning brown at 20 days. All the isolates produced microsclerotia, and the production was higher in OA than in PDA culture. Later, the nucleus staining technique was carried out, using a DAPI fluorescent marker, and nuclei in hyphae were counted under a fluorescence microscope. Ten isolates presented multinucleated hyphae, and three had bi-nucleated hyphae, indicating that these belong to genera similar to R. solani. In the phylogenetic analysis, multinucleated six isolates grouped with reference isolates from the anastomosis group AG4 HGI, two grouped with reference isolate AG2-2 and two did not group in any already described anastomosis group. Among the bi-nucleated isolates, two grouped with Waitea circinata, and one isolate grouped with Ceratobasidium ramicola. In the pathogenicity test, all 13 fungi that were inoculated were confirmed as causing collapse in the plantlets, and isolates of R. solani, Ceratobasidium and Waitea did not present significant differences in levels of aggressiveness. This is the first record of R. solani AG2-2 and AG4-HGI, Waitea sp. and Ceratobasidium ramicola in coriander in Brazil. In addition, a new phylogenetic lineage of the R. solani complex was identified in this study.