LEUCOSE ENZOÓTICA BOVINA EM CURRALEIROS PÉ-DURO: OCORRÊNCIA E SEQUENCIAMENTO DO GENE ENV

Abstract

RESUMO:O gado Curraleiro Pé-Duro (CPD) se apresenta como um taurino tropicalmente adaptado e com uma riqueza genética imensurável como, a resistência natural a ecto e endoparasitas, além de uma provável resiliência a Leucose Enzoótica dos Bovinos (LEB), enfermidade infectocontagiosa, caracterizada pelo desenvolvimento de linfossarcomas, podendo resultar na morte do animal. Esta enfermidade tem como agente um oncovírus da família Retroviridea tendo como todos os vírus alta taxa de mutações, desencadeando o surgimento de diferentes variedades de um mesmo vírus, dificultando o seu diagnóstico e controle. Por tanto levando-se em consideração a importância da conservação genética do gado CPD, sua resistência e resiliência parasitológica, a emergência de inúmeras doenças nos rebanhos bovinos brasileiros e a necessidade de melhor diagnostica-las, realizou-se este estudo com o objetivo geral de determinar a presença do vírus da LEB (VLEB) em 191 bovinos, e fazer o estudo filogenético de quatro amostras sequenciadas. Para tanto foi utilizada a técnica de reação em cadeia de polimerase (PCR) e, para verificar a prevalência entre estratos de idade e sexo nos rebanhos estudados foram utilizados a amplificação e detecção de parte do gene do envelope (env) do vírus, com 521pb sendo em seguida realizado o sequenciamento e a análise filogenética com o uso dos programas SeqScape, BlastN e Mega. A taxa total de CPD reagentes para a enfermidade foi de 7,3% (14 animais). Verificou-se um maior índice de positividade em bovinos acima de 12 meses (p<0,05) e as fêmeas (7,3%) obtiveram a mesma prevalência que os machos (7,7%) (p<0,05). Foi observado que, de 14 animais positivos para a LEB, apenas dois (1%) mostraram leucocitose o que pode indicar algum tipo de resiliência. Obteve-se com a PCR uma forte banda do tamanho esperado com 521pb atendendo ao objetivo básico de gerar produtos para o sequenciamento do fragmento do gene env do VLEB. Nas comparações de alinhamentos e na análise filogenética entre as quatro sequências obtidas (PD_BLV 10, PD_BLV 41, PD_BLV 82 e PD_BLV 98) com sequencias do GenBank foi demonstrado que o vírus infectante no rebanho de bovinos CPD estudados está mais relacionada com linhagens dos países dos EUA e Austrália. Além disso, nas sequencias PD_BLV 10 e 41 houveram 11 e 12 substituições de nucleotídeos respectivamente e nas amostras PD_BLV 82 e 98 houveram 8 substituições de nucleotídeos. Com a árvore filogenética formou-se um agrupamento Austrália-Eua; Brasileiro; Argentina-Brasil e um agrupamento Polônia, Brasil e Alemanha Este estudo permitiu analisar as sequencias de nucleotídeos do gene env, do vírus da leucose enzoótica bovina (VLEB) em bovinos nativos, sendo estes resultados úteis para aprimorar os métodos de diagnóstico e aumentar os efeitos de programas de forma a contribuir com a futura erradicação e distribuição do VLEB nos animais localmente adaptados do Brasil.

ABSTRACT:The Curraleiro Pé-Duro cattle (CPD) is presented as a tropically adapted taurine and a genetic wealth immeasurable as the natural resistance to ecto and endo-parasites, as well as a likely resilience to Enzootic Bovine Leukosis (EBL), infectious disease, characterized the development of lymphosarcomas, may result in death of the animal. This disease has a family agent as oncoviruses Retroviridea all having as high mutation rate of viruses, triggering the onset of different varieties of the same viruses, impairing its diagnosis and control. So taking into account the parasitological resistance CPD cattle, the emergence of many diseases in Brazilian cattle herds and the need to better diagnose them, first objective it is to determine the presence of the virus LEB (VLEB) in 191 CPD cattle by the polymerase chain reaction technique (PCR) and the study of the prevalence of age and sex in the studied herds. With the amplification product and detection of a fragment of the envelope gene (env) of virus was performed 521pb sequencing and genetic analysis with the use of SeqScape, BLASTN and Mega programs. In this study we enrolled a total rate of CPD reagents for the disease of 7.3% (14 animals). A higher positivity rate of cattle over 12 months was found (p <0.05) and females (7.3%) had the same prevalence than males (7.7%) (p <0.05). Of the 14 LEB positive animals, only two (1%) had leukocytosis, which may indicate some form of resilience of the disease by CPDs. Was obtained with a strong PCR band of the expected size with 521pb given the primary objective of generating products for sequencing the fragment of the env gene VLEB. In alignments of comparisons and phylogenetic analysis of the four sequences obtained (PD_BLV 10, PD_BLV 41, PD_BLV 82 and PD_BLV 98) with sequences from GenBank it was shown that the infective virus in the flock studied CPD cattle are more closely related strains the countries of USA and Australia. Furthermore, the sequences PD_BLV 10 and 41 there were 11 nucleotide substitutions and 12 respectively, in PD_BLV samples 82 and 98 there were 8 nucleotide substitutions. With the phylogenetic tree formed a grouping Australia-USA; Brazilian; Argentina-Brazil and a grouping Poland, Brazil and Germany. This study allowed us to analyze the sequences of nucleotides of the env gene of enzootic bovine leukemia virus in native cattle, which are useful results to improve diagnostics and increase the effects of programs for future eradication and distribution VLEB animals locally adapted in Brazil