EFEITO DO α-FELANDRENO NO DANO VESICAL INDUZIDO POR IFOSFAMIDA E POSSÍVEIS MECANISMOS DE AÇÃO

Abstract

RESUMO:A Cistite hemorrágica é o principal efeito adverso dose-limitante do uso clínico das oxazafosforinas, incluindo a Ifosfamida. Tal evento ocorre através da formação da acroleína, metabólito responsável pela urotoxicidade desses fármacos, resultando em aumento do estresse oxidativo e produção de citocinas pró-inflamatórias, que culminam na degradação do tecido vesical. Diante desta realidade, identifica-se uma necessidade que abre margem para o desenvolvimento de um citoprotetor eficaz que possa vir a ser utilizado como adjuvante na terapia oncológica com oxazafosforinas. Neste contexto, o objetivo desta pesquisa foi analisar o efeito protetor do α-felandreno frente a cistite hemorrágica induzida por ifosfamida. Esta pesquisa partiu das observações que o α-felandreno possui efeito antiedematogênico e anti-inflamatório, o que pressupõe que este monoterpeno é potencialmente útil na pesquisa de novos protótipos que possam combater reações inflamatórias agudas. O modelo de cistite hemorrágica foi induzido por dose única do antineoplásico ifosfamida, precedido de pré-tratamento com salina e α-felandreno (6,25; 12,5; 25; 50 e 100 mg/kg, i.p.) em Mus musculus (CEUA 279/2016). Para analisar a redução do dano foi avaliado o peso úmido vesical (PUV), teor de hemoglobina e o extravasamento do corante azul de evans na matriz vesical. Para caracterizar o envolvimento da migração neutrofílica, peroxidação lipídica e dos antioxidantes enzimáticos e não enzimáticos endógenos foram avaliados os marcadores teciduais Mieloperoxidase (MPO), Malondialdeído (MDA), Nitrito/Nitrato (NOx), Superóxido dismutase (SOD) e Glutationa Reduzida (GSH), respectivamente. As citocinas inflamatórias (TNF- α e IL-1β) foram dosadas por técnica de imunoensaio ELISA. Os dados de inibição foram calculados por normalização em relação ao controle negativo (CN) e significâncias calculadas considerando p<0,05. Os resultados mostram que o pré-tratamento com o α-felandreno (12,5 e 25 mg/kg) restringiu significativamente em 31,59 ± 0,8 e 29,90 ± 0,3 %, respectivamente, o PUV em comparação ao CN. As análises espectrofotométricas mostraram que o pré-tratamento atenuou de forma significativa em 65,7 ± 4 % a hemorragia e em 39,3 ± 8 % o extravasamento vascular de proteínas na melhor dose testada (25 mg/kg). As avaliações dos marcadores teciduais de inflamação/estresse oxidativo mostraram que na melhor dose testada (25 mg/kg) o α-felandreno reduziu MPO (62,13 ± 1 %), MDA (25,9 ± 2 %) e NOx (15,89 ± 0,1 %), significativamente em relação ao CN (p<0,05). A prevenção da depleção dos antioxidantes endógenos pelo α-felandreno foi significante e teve percentual de 88,2 ± 18% e 108,1 ± 10 % nos níveis de SOD e GSH respectivamente. Na avaliação de citocinas, o α-felandreno foi capaz de reduzir significativamente os níveis TNF-α (28,45 ± 11 %), mas não alterou de forma significativa os níveis de IL-1β (22,7 ± 4 %). Assim pode-se concluir que o monoterpeno α-felandreno foi capaz de atenuar a cistite hemorrágica induzida por ifosfamida e apresentou potencial inibição de parâmetros do estresse oxidativo e redução nos níveis de TNF-α.

ABSTRACT:Hemorrhagic cystitis is the main dose-limiting adverse effect of the clinical use of oxazaphosphorins, including ifosfamide (IFOS). This event occurs through the formation of acrolein, a metabolite responsible for the urotoxicity of these drugs, resulting in increased oxidative stress and production of proinflammatory cytokines, culminating in tissue degradation of the bladder tissue. Given this reality, it identifies a need that makes room for the development of an effective cytoprotective that may be used as an adjuvant in cancer therapy oxazaphosphorines. In this context, it is known that α-felandrenus has an anti-inflammatory effect, which indicates that this monoterpene is potentially useful in the investigation of new prototypes that can combat acute inflammatory reactions. In this context, the uroprotective effect of monoterpene α-phellandrene was evaluated against the hemorrhagic cystitis model induced by ifosfamide. The hemorrhagic cystitis model was induced by single dose antineoplastic ifosfamide (400 mg / kg ip) preceded by pretreatment with saline and α-phellandrene (6.25, 12.5, 25, 50 and 100 mg / kg ip) in Mus musculus (CEUA 279/2016). In order to analyze the reduction of the damage, the bladder wet weight , hemoglobin content and the evans blue dye extravasation from the bladder matrix were evaluated (PUV),. In order to characterize the involvement of neutrophil migration, lipid peroxidation and involment of enzymatic and endogenous non-enzymatic antioxidants, the tissue markers Mieloperoxidase (MPO), Malondialdehyde, Nitrite / Nitrate (NOx), Superoxide dismutase (SOD) and Reduced Glutathione (GSH) were evaluated respectively. Inflammatory cytokines (TNF-α and IL-1β) were measured by ELISA immunoassay technique. Inhibition data were calculated by normalization in relation to the negative control (CN) and significance calculated considering p <0.05. The results show that pre-treatment with α-phellandrene (12.5 and 25 mg / kg) significantly reduced by 31.59 ± 0.8 and 29.90 ± 0.3%, respectively, PUV in comparison to CN. The spectrophotometric analysis showed that pretreatment significantly reduced bleeding by 65.7 ± 4% and vascular extravasation of proteins at the best dose tested (25 mg / kg) by 39.3 ± 8%. The evaluation of the tissue markers of inflammation / oxidative stress showed that in the best dose tested (25 mg / kg) α-phellandrene reduced MPO (62.13 ± 1%), MDA (25.9 ± 2%) NOx (15, 89 ± 0.1%), significantly in relation to CN (p <0.05). The prevention of the depletion of endogenous antioxidants by α-phellandrene was significant and showed a percentage of 73.0 ± 18% and 86.6 ± 10% in the levels of SOD and GSH respectively. In the assessment of cytokines, α-phellandrene was able to significantly reduce TNF-α levels (28.45 ± 11%), but did not significantly alter IL-1β levels (22.7 ± 4%), The monoterpene α-phellandrene was able to attenuate hemorrhagic cystitis induced by ifosfamide, it showed potential inhibition of oxidative stress parameters and reduction in levels of TNF-α.