ESTUDO DAS ATIVIDADES ANTI- E PRÓ-INFLAMATÓRIA DO LÁTEX DE Plumeria pudica (JACQ., 1960)

Abstract

RESUMO:Os fluidos laticíferos têm sido explorados devido ao seu vasto potencial farmacológico, incluindo, atividade anti-inflamatória, antimicrobiana e antitumoral. Entretanto, são também descritos como detentores de moléculas pró-inflamatórias e com propriedades tóxicas. Plumeria pudica Jacq. é uma planta ornamental caracterizada pela intensa produção de látex. Estudos realizados com seu látex têm demostrado que sua fração proteica (PLPp) apresenta ação anti-inflamatória em diferentes modelos animais. Por outro lado, o látex desta planta não foi investigado quanto a presença de moléculas com ação pró-inflamatória. Diante dos relatos de que as atividades anti- e pró-inflamatória podem coexistir em fluidos laticíferos, o objetivo desse estudo foi de investigar a presença destas atividades nas frações obtidas do látex de P. pudica. O látex foi coletado em água destilada (1:1; v/v) e submetido a fracionamento por meio de centrifugação e diálise contra água destilada utilizando membranas com porosidade de 8 kDa. Foram obtidas duas frações distintas, a fração Proteínas do Látex (PLPp), caracterizada pela presença de moléculas com massa molecular superior a 8 kDa e a fração Dialisado do Látex (DLPp), compreendendo moléculas com massa molecular inferior a 8 kDa. Para verificar a presença de atividade pró-inflamatória, diferentes concentrações das frações PLPp e DLPp (100, 300 e 500μg) solubilizadas em salina estéril (0,9%) foram administradas por via intraplantar em camundongos. A atividade anti-inflamatória de DLPp (10, 20 e 30 mg/kg) foi investigada no modelo de edema de pata induzido por carragenina. Para avançar no estudo do mecanismo de ação pró-inflamatória de DLPp, animais foram pré-tratados com Cloridrato de Prometazina (PROM), um fármaco anti-histamínico, antes de receberem DLPp. Em paralelo, foi investigado se PLPp, detentora de atividade anti-inflamatória, poderia inibir a ação pró-inflamatória promovida por DLPp. Para complementar, as atividades das enzimas mieloperoxidase (MPO) e superóxido dismutase (SOD) foram determinadas. O teor de proteínas solúveis em DLPp foi avaliado bem como o perfil proteico por eletroforese em gel de poliacrilamida (17,5%). Além disso, a presença de histamina em DLPp foi investigada por espectrofotometria. Como resultados observamos que somente a fração DLPp (300 μg/pata) induziu a formação do processo inflamatório, com pico ocorrendo nos primeiros 30 minutos. A inflamação induzida por DLPp foi inibida pelo anti-histamínico PROM e PLPp. Não houve alteração nas atividades de MPO e SOD, sugerindo o não envolvimento de células de defesa na indução da inflamação. Em relação à atividade anti-inflamatória, DLPp não inibiu significativamente a inflamação nas concentrações testadas. A composição de DLPp releva uma baixa concentração de proteínas solúveis com a presença de peptídeos e de histamina. Portanto, é possível concluir que o látex de P. pudica induz inflamação aguda e que as propriedades pró- e anti-inflamatória coexistem no látex da planta, podendo ser separadas por meio de etapas de centrifugação e diálise.ABSTRACT:Lactiferous fluids have been exploited due to its very large pharmacological potential, including, anti-inflammatory, antimicrobial and antitumor activity. However, they are also described to have proinflammatory and toxic molecules. Plumeria pudica Jacq. is an ornamental plant characterized by intense latex production. Studies with its latex have shown that its protein fraction (PLPp) has anti-inflammatory action in different animal models. On the other hand, the latex of this plant has not been investigated for the presence of molecules with proinflammatory action. Considering that anti-inflammatory and proinflammatory activities can coexist in laticiferous fluids, the objective of this study was to investigate the presence of these activities in the fractions obtained from P. pudica latex. The latex was collected in distilled water (1:1; v/v) and fractioned by centrifugation and dialysis against distilled water using membranes with 8 kDa porosity. Two distinct fractions were obtained, the Latex Proteins fraction (PLPp), characterized by the presence of molecules with molecular weight higher than 8 kDa and the Dialyzed Latex fraction (DLPp), comprising molecules with a molecular weight less than 8 kDa. In order to verify the presence of proinflammatory activity, different concentrations of PLPp and DLPp (100, 300 and 500μg) solubilized in sterile saline (0.9%) were administered intraplantarly in mice. The anti-inflammatory activity of DLPp (10, 20 and 30 mg/kg) was investigated in the carrageenan-induced paw edema model. Advancing the study of the proinflammatory action mechanism of DLPp, animals were pretreated with Promethazine Hydrochloride (PROM), an antihistamine drug, before receiving DLPp. Simultaneously, inhibition of DLPp-induced paw edema by PLPp, which possesses anti-inflammatory activity, was investigated. In addition, the activities of the myeloperoxidase (MPO) and superoxide dismutase (SOD) enzymes were determined. The content of soluble proteins in DLPp was evaluated as well as the protein profile by electrophoresis in polyacrylamide gel (17.5%). In addition, the presence of histamine in DLPp was investigated by spectrophotometry. As a result, we observed only the DLPp fraction (300 μg/pata) induced the formation of the inflammatory process, occurring the peak within the first 30 minutes. The DLPp-induced inflammation was inhibited by the antihistamine PROM and PLPp. There was no change in MPO and SOD activities, suggesting the non-involvement of defense cells in the induction of inflammation. Regarding anti-inflammatory activity, DLPp did not significantly inhibit inflammation at the concentrations tested. The composition of DLPp shows a low concentration of soluble proteins with the presence of peptides and histamine. In summary, P. pudica latex induces acute inflammation and the proinflammatory and anti-inflammatory properties coexist in the latex of this plant and they can be separated by centrifugation and dialysis steps.