AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIDIARREICA DE PROTEÍNAS DO LÁTEX DE Plumeria pudica (JACQ., 1760) PARNAÍBA 2016

Abstract

RESUMO O látex vegetal é um fluido de aspecto leitoso liberado por certas espécies quando estas sofrem algum tipo de injúria mecânica, e configura-se como importante fonte de compostos bioativos. Vários artigos descrevem propriedades farmacológicas de compostos obtidos a partir de látex, como exemplo do látex de Plumeria pudica, que demonstrou apresentar atividade anti-inflamatória e antinociceptiva. Nesse contexto, o presente trabalho teve como principal objetivo avaliar a capacidade de proteínas obtidas a partir do látex de P. pudica em interferir na atividade antidiarreica em camundongos, utilizando modelos de diarreia induzidos por óleo de rícino. Primeiramente o látex de P. pudica foi coletado e fracionado, e o produto resultante foi denominado de PL e utilizado nos demais experimentos. PL foi submetido a tratamento térmico e químico com o intuito de identificar a natureza da amostra, e as diferentes frações foram avaliadas por eletroforese (SDS-PAGE). Foram feitos ensaios biológicos para testar a atividade de PL nos modelos de diarreia induzida por óleo de rícino, enteropooling e trânsito gastrintestinal. Concomitantemente foram feitas dosagens dos níveis de glutationa reduzida (GSH) e malondialdeído (MDA) na mucosa intestinal, marcadores de estresse oxidativo. Os resultados demonstraram que a administração de PL (10, 20 e 40mg/kg, i.p.) reduziu significativamente (p <0,05) o número de fezes totais e diarreicas, bem como à gravidade da diarreia em camundongos, no modelo de diarreia induzida por óleo de rícino. Os maiores valores de inibição de fezes totais (70,51%) e diarreicas (59,70%) foram obtidos no grupo pré-tratado com PL (40mg/kg, i.p.), dose esta utilizada nos demais ensaios biológicos. O grupo que recebeu loperamida (LOP) (5mg/kg, v.o.), droga utilizada para tratamento e estudo da diarreia, também reduziu significativamente (p<0,05) a quantidade de fezes totais (74,87%) e diarreicas (73,00%). A atividade antidiarreica foi perdida quando a fração PL foi submetida a tratamento térmico, demonstrando que as proteínas com ação antidiarreica são sensíveis ao aumento de temperatura. Entretanto, a fração PL coletada com iodoacetamida conservou sua atividade, evidenciando que o efeito antidiarreico não está envolvido com a ação de proteases cisteínicas. Uma avaliação do perfil de proteínas presentes na fração PL, por meio de eletroforese, demonstrou significativas alterações no conteúdo proteico de PL após os tratamentos térmico e químico. No ensaio de enteropooling, observou-se que PL (40mg/kg, i.p.) reduziu o volume de secreção de fluido no lúmen intestinal (31,42%), e como esperado, o grupo LOP (5mg/kg, v.o.) também reduziu a secreção (40,00%) (p<0.05). Além disso, PL (40mg/kg, i.p.) diminuiu significavamente a distância percorrida por uma refeição de carvão vegetal no modelo de trânsito gastrointestinal, semelhante ao grupo LOP (5mg/kg, v.o.). PL reduziu significativamente os níveis de MDA e aumentou os níveis de GSH. Os dados obtidos demostram que PL foi capaz de inibir a diarreia induzida por óleo de rícino e reduzir o estresse oxidativo intestinal. ABSTRACT: Vegetable latex is a milky fluid released by certain species when they suffer some kind of mechanical injury and is configured as an important source of bioactive compounds. Various articles describe the pharmacological properties of compounds obtained from latex, as an example of Plumeria pudica latex, which was shown to have anti-inflammatory and antinociceptive activity. In that context, this study aimed to assess the ability of proteins from P. pudica (PL) latex to interfere in the antidiarrheal activity in mice using models diarrhea induced by castor-oil. First P. pudica latex was collected and fractionated, and the resulting product was named PL and used in the other experiments. PL was subjected to thermal and chemical treatment in order to identify the nature of the sample, and the different fractions were analyzed by electrophoresis (SDS-PAGE). Biological tests were performed to test the LP activity in models of diarrhea induced by castor oil, enteropooling and gastrointestinal transit. Concomitantly dosages were made of the levels of reduced glutathione (GSH) and malondialdehyde (MDA) in the intestinal mucosa, markers of oxidative stress. The results showed that administration of PL (10, 20 and 40mg / kg, ip) significantly (p<0.05) the number of total diarrheal stool and as well as the severity of diarrhea in mice in induced diarrhea model by castor oil. The greatest inhibition of total feces values (70.51%) and diarrhea (59.70%) were obtained in the group pretreated with PL (40mg / kg, i.p.), a dose used in other bioassays. The group receiving loperamide (LOP) (5mg/kg, po), the standard drug for the study of diarrhea also significantly reduced (p<0.05) the total amount of faeces (74.87%) and diarrhea (73.00%). The antidiarrheal activity was lost when the PL fraction was subjected to heat treatment, demonstrating that proteins with antidiarrheal action are sensitive to increasing temperature. However, the PL fraction collected with iodoacetamide retained its activity, showing that the antidiarrheal effect is not involved with the action of cysteine proteases. A profile evaluation of proteins present in the fraction PL, by electrophoresis, showed significant changes in PL protein content after thermal and chemical treatments. In enteropooling test, revealed that PL (40mg/kg, ip) reduced the volume of fluid secretion in the intestinal lumen (31.42%), and as expected, the LOP group (5mg/kg, po) also reduced secretion (40.00%) (p<0.05). In addition, PL (40 mg / kg, ip) significantly reduced the distance traveled by the charcoal meal gastrointestinal transit model similar to the LOP group (5mg / kg, po). PL significantly reduced MDA levels and increased levels of GSH. The data obtained demonstrate that PL was able to inhibit the diarrhea induced by castor oil and reduce intestinal oxidative stress.