AVALIAÇÃO DAS ATIVIDADES ANTIOXIDANTE, CITOTÓXICA, ANTILEISHMANIA E IMUNOMODULADORA DO EXTRATO HIDROALCOÓLICO, FRAÇÃO ACETATO DE ETILA E COMPOSTOS ISOLADOS A PARTIR DAS FLORES DE PLATONIA INSIGNIS MART.

Abstract

RESUMO: As leishmanioses afetam mais de 12 milhões de pessoas em todo o mundo, com cerca de 3 milhões de novos casos a cada ano. As terapias de escolha são limitadas, apresentam efeitos tóxicos e contribuem para a resistência do parasita. A espécie Platonia insignis Mart. ("bacurizeiro") demonstra ser uma alternativa promissora ao tratamento de diversas enfermidades, por ser rica em compostos ativos com propriedades antitumoral, anti-inflamatória, antioxidante, anticonvulsivante, citotóxica e antileishmania. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a atividade citotóxica, antioxidante, antileishmania e imunomoduladora do extrato hidroalcoólico (EHPi), fração acetato de etila (FAcOEt) e compostos isolados das flores de P. insignis. Para avaliação da citotoxicidade in vitro foram realizados os ensaios do MTT em macrófagos peritoneais de camundongos BALB/c, atividade hemolítica em eritrócitos de carneiro e antioxidante in vivo em leveduras de Saccharomyces cerevisiae. Constatou-se que a GFC foi a substância que apresentou o maior potencial citotóxico sobre os macrófagos murinos, com CC50=45,20 μg/mL e a FAcOEt o menor, com CC50=134,28 μg/mL, enquanto que a MB e o EHPi apresentaram valores de CC50 de 81,77 e 159,68 μg/mL, respectivamente. As amostras não apresentaram atividade hemolítica em nenhuma das concentrações analisadas. O EHPi e a FAcOEt apresentaram atividade antioxidante independente da concentração. Para avaliação da viabilidade celular sobre as formas promastigotas, ultilizou-se o método colorimétrico da resazurina. A GFC apresentou o maior poder de redução da viabilidade de formas promastigotas (IC50=45,19 μg/mL) e amastigotas (IC50=8,48 μg/mL) de L. amazonensis. Para formas promastigotas, a FAcOEt, o EHPi e MB apresentaram IC50 de 23,05, 30,80 e 45,71 μg/mL, reespectivamente. O EHPi (30 μg/mL) e a FAcOEt (60 μg/mL) reduziram a infecção de macrófagos, porém não foram capazes de reduzir a infectividade quando comparados ao controle (Anf B). Na avaliação dos mecanismos de imunomodulação de macrófagos, o EHPi, a FAcOET e a MB promoveram aumento da atividade lisossomal, enquanto a FAcOET, a MB e a GFC foram capazes de promover aumento da capacidade fagocítica e da produção de nitrito. Portanto, conclui-se que a GFC apresenta significativo potencial antileishmania, demonstrado pela maior seletividade para o parasito. O EHPi, a FAcOEt e a MB podem ser utilizados como uma terapia de suporte à quimioterapia convencional antileishmania, pois demonstraram ser proponentes imunoestimuladores que auxiliariam no combate ao parasito.ABSTRACT:Leishmaniasis affect more than 12 million people worldwide, with around 3 million of new cases each year. The therapies of choice are limited, have toxic effects and contribute to the resistance of the parasite. The species Platonia insignis Mart. ("bacurizeiro") has been shown to be a promising alternative to the treatment of several diseases, since it is rich in active compounds with antitumor, anti-inflammatory, antioxidant, anticonvulsant, cytotoxic and antileishmania properties. The aim of the present study was to evaluate the cytotoxic, antioxidant, antileishmania and immunomodulatory activity of the hydroalcoholic extract (EHPi), ethyl acetate fraction (FAcOEt) and compounds isolated from P. insignis flowers. In order to evaluate the in vitro cytotoxicity the MTT assays were performed on peritoneal macrophages from BALB/c mice, the hemolytic activity on sheep erythrocytes and in vivo antioxidant activity in S. cerevisiae yeasts. GFC was the substance with the highest cytotoxic potential on murine macrophages, with CC50=45.20 μg/mL, and FAcOEt the lowest, one with CC50=134.28 μg/mL, whereas MB and the EHPi presented intermediate CC50 values of 81.77 and 159.68 μg/mL, respectively. The compounds did not present hemolytic activity at any tested concentrations. EHPi and FAcOEt presented antioxidant activity independent of concentration. The colorimetric method of resazurin was used to evaluate cell viability on promastigote forms. GFC presented the greatest viability reduction potential of promastigotes (IC50=45.19 μg/mL) and amastigotes (IC50=8.48 μg/mL) of L. amazonensis. Against promastigote forms, FAcOEt, EHPi and MB showed IC50 of 23.05, 30.80 and 45.71 μg/mL, repectively. EHPi (30 μg/mL) and FAcOEt (60 μg/mL) statistically decreased infection of macrophages, but not the infectivity when compared with control (Anf B). Concerning the evaluation of immunomodulatory mechanisms in macrophages, EHPi, FAcOET and MB, but not GFC, promoted increase of lysosomal activity, while FAcOET, MB and GFC were able to promote increase of phagocytic capacity and nitrite production. Thus, it was concluded that GFC present a marked antileishmania potential, demonstrated by a greater selectivity to the parasite, indicating a lower cytotoxicity for macrophages and erythrocytes. EHPi, FAcOEt and MB can be used as supportive therapy for conventional antileishmania chemotherapy, as they have demonstrate to be immunostimulatory and might assist in the combat against parasite.