PRODUÇÃO IN VITRO DE EMBRIÕES BOVINOS EM MEIO SUPLEMENTADO COM CAPTOPRIL

Abstract

RESUMO: A maturação oocitária é um processo fundamental na produção in vitro de embriões visto que as etapas seguintes do processo são dependentes da maturação completa dos oócitos. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da suplementação do meio de maturação com captopril, e suas consequências na maturação, fecundação e desenvolvimento embrionário in vitro bovino. Foram utilizados 326 ovários bovinos provenientes de um abatedouro do município de Teresina-PI. Foram recuperados 1101 CCOs e classificados em graus I e II, de acordo com a qualidade morfológica, e distribuído em quatro grupos experimentais: G1 (n=112) controle; G2 (n=322) 20μM de captopril; G3 (n=367) 40μM de captopril; e G4 (n=300) 80μM de captopril. Posteriormente submetidos ao processo de maturação in vitro (MIV) por 24 horas em micro gotas sob óleo de silicone a 38,5ºC, em 5% de CO2. Os CCOs maturados foram fertilizados in vitro, utilizando sêmen criopreservado proveniente de um touro da raça Curraleiro Pé-Duro de mesma coleta, selecionados através de gradientes de Percoll (45, 90%) e co-incubados em temperatura de 38,5ºC por 20 horas, em 5% de CO2. Após a fertilização, 676 presumíveis zigotos foram cultivados e mantidos em estufa à temperatura de 38,5ºC, em 5% de CO2, durante 7 dias. No quinto dia de cultivo foi realizado o feeding (troca de 50% do meio). A avaliação da taxa de clivagem foi observada 48 horas após a fertilização, e a formação de blastocisto, 168 horas após. O total de embriões viáveis foi de 12; 39; 32 e 31, respectivamente para os grupos experimentais G1, G2, G3 e G4. Para mensuração da taxa de maturação foram avaliados 470 CCOs e classificados aqueles de grau I e II, de acordo com a qualidade morfológica, e distribuídos em quatro grupos experimentais: G1 (n=56) controle; G2 (n=152) 20μM de captopril; G3 (n=126) 40μM de captopril; e G4 (n=136) 80μM de captopril e posteriormente submetidos ao processo de maturação in vitro (MIV) por 24 horas a 38,5ºC, em 5% de CO2. Após 24 horas de maturação, os oócitos foram desnudados com hialuronidase 0,2% em tampão fosfato salino (PBS) com auxílio de um agitador tipo vortex por 4 minutos. Os oócitos que possuíam o 1°corpúsculo polar foram considerados em fase de MII (maturados). As taxas de maturação, clivagem e desenvolvimento embrionário foram comparados pelo Kruskal Wallis. Concluiu-se que a adição de captopril ao meio de MIV de oócitos bovinos não influencia positivamente o desenvolvimento embrionário, como evidenciado pelas porcentagens similares de produção de embriões. ABSTRACT: Oocyte maturation is a fundamental process at in vitro production of embryos, which process the following steps are dependent on the complete maturation of the oocytes. The objective of this study was to evaluate the effects of supplementation of the maturation medium with captopril, and its consequences in the maturation, fertilization and embryo development in vitro bovine. 326 cattle ovaries from an abattoir in the city of Teresina-PI were used. 1101 COCs were recovered and classified into grades I and II, according to the morphological quality and distributed in four groups: G1 (n = 112) control; G2 (n = 322) 20μM of captopril; G3 (n = 367) 40μM of captopril; and G4 (n = 300) 80μM of captopril. Subsequently submitted to in vitro maturation process (IVM) for 24 hours in micro-droplets in silicon oil at 38.5 ° C in 5% CO2. The COCs were matured in vitro fertilized used cryopreserved semen from a "Curraleiro Pé-Duro" bull, from the same cryopreserved semen from the same collection were selected using a Percoll gradients (45 90%) and co-incubated in a 38.5 ° C temperature for 20 hours in 5% of CO2. After fertilization, 676 presumptive zygotes were cultured and maintained in oven at temperature of 38.5 ° C, 5% of CO2 for 7 days. On the fifth day of cultivation was carried out feeding (exchange 50% of medium). The evaluation of the rate of cleavage was observed 48 hours after fertilization and blastocyst formation 168 hours after. The total number of viable embryos was 12; 39; 32 and 31, respectively, for the experimental groups G1, G2, G3 and G4. To evaluate the maturation rate were evaluated 470 COCs and classified grades I and II, according to the morphological quality and distributed in four groups: G1 (n = 56) control; G2 (n = 152) 20μM of captopril; G3 (n = 126) 40μM of captopril; and G4 (n = 136) 80μM of captopril and then submitted to in vitro maturation process (IVM) for 24 hours at 38.5 ° C in 5% of CO2. After 24 hours of maturation, oocytes were denuded with hyaluronidase in 0.2% phosphate buffered saline (PBS) using a vortex for 4 minutes. The oocytes that had the 1st polar body were considered in MII phase (matured). The maturation rate, cleavage and embryo development were compared using Kruskal Wallis.