ESTUDO QUÍMICO E POTENCIAL ANTILEISHMANIA E ANTICOLINESTERÁSICO DE Tocoyena hispidula STANDL

Abstract

RESUMO A espécie Tocoyena hispidula (Rubiaceae-Ixoroideae) é conhecida popularmente por flor-do cerrado/angelca e jenipapinho. Suas raízes são tradicionalmente utilizadas no combate à dor de barriga e inflamação do útero. Este trabalho relata o isolamento e/ou identificação dos constituintes químicos dos extratos EtOH do caule e folhas de T. hispidula, bem como avalia seu potencial antileishmania e anticolinesterásico. O fracionamento cromatográfico dos extratos EtOH do caule e folhas de T. hispidula resultou em 62 compostos, identificados por RMN de 1H e 13C (1D e 2D), CG-EM, UV, IV e espectrometria de massas por inserção direta. O extrato EtOH do caule forneceu, após cromatografia em coluna filtrante de gel de sílica, as frações hexânica, CHCl3, AcOEt e MeOH. O estudo da fração CHCl3 conduziu ao isolamento de oito compostos puros [morindolídeo (1), lupenona (11), ácido acetiloleanólico (12), escopoletina (33), isofraxidina (34), lapachol (35), chelidonato de metila (36) e D-(+)-manitol (39)] e quatro misturas (M1-M4): M1 [lupeol (16), β-amirina (17), taraxerol (18), germanicol (19) e E-fitol (20)], M2 [palmitato, margarato, linoleato, oleato e estearato de lupeíla (16a-6e), multiflorenila (21a-21e), sitosterila (22a-22e) e estigmasterila (23a-23e)], M3 (sitosterol (22), estigmasterol (23), campesterol (24), campestanol (25), sitostanol (26) e Δ22-estigmastenol (27)] e M4 [7-cetositosterol (29) e 7-cetoestigmasterol (30)]. O estudo da fração AcOEt resultou no isolamento e identificação do ácido oleanólico (15), ácido benzoico (38), sitosterol-3-O--D-glicopiranosídeo (28) e de três misturas estereoisoméricas de iridoides: - gardiol (2a) e -gardiol (2b), 10-hidroxi-1-oxo-7-irideno-11-ato de metila (3a) e 10-hidroxi- 1-oxo-7-irideno-11-ato de metila (3b), -genipina (4a) e genipina (4b). A partir da fração MeOH foram obtidos os iridoides glicosilados 6-hidroxigeniposídeo (5), 6- hidroxigeniposídeo (6), gardenosídeo (7), éster metílico shanzhisídeo (8) e geniposídeo (9) e, as saponinas triterpênicas 3-O--L-ramnopiranosil-(1→2)--D-glicopiranosil-oleanoato de 28-O--D-glicopiranosil-(1→6)--D-glicopiranosila (31) e eritrosaponina A (32). A partição do extrato EtOH das folhas, forneceu as frações hexânica, AcOEt e aquosa. O fracionamento cromatográfico da fração hexânica resultou no isolamento do esqualeno (10), ácido rotungênico (13), E-fitol (20), -tocoferol (37), palmitato de multiflorenila (21a), mistura dos esteroides sitosterol (22) e estigmasterol (23) e mistura dos ácidos ursólico (14) e oleanólico (15). A partir da fração aquosa foi obtida uma mistura dos iridoides 5 e 6. O extrato EtOH, frações e os compostos 1 e 36 do caule de T. hispidula, inibiram o crescimento de promastigotas de Leishmania major, sendo as frações CHCl3 (CI50=26,25 μg mL-1) e AcOEt (CI50=29,77 μg mL-1) as mais ativas. O extrato EtOH e as frações hexânica, AcOEt e aquosa das folhas e a fração CHCl3 do caule de T. hispidula apresentaram indicativo de inibição da enzima acetilcolinesterase. Os resultados obtidos contribuem para o conhecimento da composição química e potencial antileishmania e anticolinesterásico da espécie T. hispidula, e corroboram com a classificação taxonômica desta espécie. ABSTRACT The species Tocoyena hispidula (Rubiaceae-Ixoroideae) is popularly known as “flor-do cerrado”/” angelca” and “jenipapinho”. Its roots are traditionally used to intestinal pain and uterine inflammation combat. This work reports the isolation and/or identification of the chemical constituents of EtOH extracts from the stem and leaves of T. hispidula, as well as evaluates its antileishmanial and anticholinesterase potential. Chromatographic fractionation of the EtOH extract from the stem and leaves of T. hispidula resulted in 62 compounds identified by 1H and 13C NMR (1D and 2D), GC-MS, UV, IR and insertion mass spectrometry direct. EtOH extract from the stem provided, after silica gel filter column chromatography, the hexane, CHCl3, EtOAc and MeOH fractions. The study of the CHCl3 fraction led to the isolation of eight pure compounds [morindolide (1), lupenone (11), acetyloleanolic acid (12), scopoletin (33), isofraxidin (34), lapachol (35), dimethyl chelidonate (36) and D-(+)-mannitol (39)] and four mixtures (M1-M4): M1 [lupeol (16), -amyrin (17), taraxerol (18), germanicol (19) and E-phytol (20)], M2 (campesterol, campestanol, stigmasterol, Δ22-stigmastenol, sitosterol and sitostanol), M3 [palmitate, margarate, linoleate, oleate and stearate of the lupeyl (16a-16e), multiflorenyl (21a-21e), sitosteryl (22a-22e) and stigmasteryl (23a-23e)], M4 (7- ketositosterol (29) and 7-ketoestigmasterol (30). The study of EtOAc fraction resulted in the isolation and identification of oleanolic acid (15), benzoic acid (38), sitosterol-3-O--Dglucopyranoside (28) and three stereoisomeric mixtures of iridoids: -gardiol (2a) and - gardiol (2b), 10-hydroxy-1-oxo-7-iriden-11α-oic acid methyl ester (3a) and 10-hydroxy-1- oxo-7-iriden-11-oic acid methyl ester (3b), -genipin (4a) and genipin (4b). From the MeOH fraction the glycosylated iridoids 6-hydroxyigeniposide (5), 6-hydroxyigeniposide (6), gardenoside (7), shanzhiside methyl ester (8) and geniposide (9) were obtained and triterpene saponins 3-O--L-rhamnopyranosyl-(1→2)--D-glucopyranosyl oleanolic acid 28- O--D-glucopyranosyl-(1→6)--D-glucopyranosyl ester (31) and erythrosaponin A (32). The partition of EtOH extract from the leaves gave the hexane, EtOAc and aqueous fractions. Chromatographic fractionation of the hexane fraction resulted in the isolation of squalene (10), rotungenic acid (13), E-phytol (20), -tocopherol (37), multiflorenyl palmitate (21a), an sitosterol (22) and stigmasterol (23) steroid mixture and ursolic (14) and oleanolic acid (15) mixture. From the aqueous fraction the 5 and 6 iridoids mixture, was obtained. EtOH extract, fractions and compounds of 1 and 36 from T. hispidula stem inhibited the growth of Leishmania major promastigotes, being the CHCl3 (IC50=26.25 μg mL-1) and EtOAc (IC50=29.77 μg mL-1) fractions the most actives. EtOH extract and hexane, EtOAc and aqueous fractions of the leaves and the CHCl3 fraction of the T. hispidula stem were indicative of inhibition of the enzyme acetylcholinesterase. The results obtained contribute to the knowledge of the chemical composition and antileishmanial and anticholinesterase potential of the species T. hispidula, and corroborate with the taxonomic classification of this species.