AVALIAÇÃO DO PERFIL DE EXPRESSÃO GÊNICA DE PROMASTIGOTAS EM CULTURA AXÊNICA DE CEPAS DE L. INFANTUM DE PACIENTES COM DOENÇA GRAVE E NÃO GRAVE

Abstract

RESUMO A leishmaniose visceral (LV) é causada pelas espécies Leishmania donovani e Leishmania infantum e clinicamente, a doença apresenta desfechos variáveis, cursando da forma assintomática à doença grave e fatal, principalmente se não for tratada. A febre, perda de peso, pancitopenia e hepatoesplenomegalia constituem os principais sintomas desta síndrome. Vários fatores relacionados com o hospedeiro e o parasita são considerados importantes para o estabelecimento da doença. Na Leishmania, os fatores de virulência destacam-se como meios que facilitam a permissividade da invasão e o crescimento destes organismos nos hospedeiros. Muitos genes da Leishmania estão associados com esses fatores de virulência e atualmente existem diversas tecnologias que permitem o sequenciamento dos genes do DNA em larga escala. A técnica de RNA-Seq, através da plataforma Illumina HiSeq2500, foi utilizada para sequenciar um total de 20 amostras de promastigotas de Leishmania infantum de pacientes previamente classificados como grave e não grave. Os dados do sequenciamento foram analisados por ferramentas de bioinformática e 8364 transcritos foram mapeados no genoma de referência (L. infantum JPCM5). A análise de expressão diferencial entre os grupos grave e não grave mostrou uma baixa correlação da expressão diferencial entre os genes dos grupos, porém o grupo grave expressou 3 genes (Linj.28.29.50; Linj. 151240 e o Linj.23.rRNA1) diferentes e upregulados que não foram expressos no grupo não grave. Já o grupo não grave expressou 50 genes upregulados. Neste trabalho foram identificados e anotados genes upregulados expressados tanto no grupo grave quanto no grupo não grave. O gene Hsp 70 (LinJ. 28.29.50) e o gene transportador de nucleosídeo (LinJ. 151240) foram fortemente expressos, no grupo grave. Vários desses genes expressos, já são discutidos como possíveis fatores de virulência e de resistência a drogas leishnmanicidas. Estudos futuros serão necessários para uma análise mais ampliada da correlação entre esses genes e o desenvolvimento da LV, contribuindo com o conhecimento sobre a patogênese desta doença e gerando meios para o desenvolvimento de estratégias que intervenham no processo infeccioso e auxilie no controle e erradicação desta doença. ABSTRACT Visceral leishmaniasis (VL) is caused by Leishmania donovani and Leishmania infantum and clinically, the disease presents variable outcomes, asymptomatic to severe and deadly disease, especially if left untreated. The fever, weight loss, pancytopenia and hepatosplenomegaly are the main symptoms of this syndrome. Many factors related to host and parasite are considered important for the establishment of the disease. In Leishmania, the virulence factors highlight as means that make ease the permissiveness of invasion and the growth of these organisms in hosts. Many Leishmania genes are associated with these virulence factors and there are currently several technologies that allow the sequencing of DNA genes on a large scale. The technique of RNA- Seq, through the Illumina HiSeq2500 platform, was used to sequence a total of 20 samples of promastigotes of Leishmania infantum from patients previously classified as severe and non- severe. Sequencing data were analyzed by bioinformatics tools and 8364 transcripts were mapped into the genome of reference (L. infantum JPCM5).The analysis of differential expression between the severe and non-severe groups, showed off a low correlation of the differential expression between the genes groups, but the severe group expressed 3 genes (LinJ.28.2950, LinJ.15.1240 and LinJ.23.rRNA1) different and upregulated that were not expressed in the non-severe group. Also, the non-severe group expressed 50 upregulated genes. In this work, it was identified and wrote down upregulated genes expressed as in the severe group as in the non-severe group. The Hsp 70 gene (LinJ. 28.2950) and the nucleoside transporter gene (LinJ.15.1240) were strongly expressed in the severe group. Many of these genes expressed, are already discussed as possible virulence factors and resistance to leishmanial drugs. Future studies will be needed for a more expanded analysis of the correlation between these genes and the development of VL, contributing to the knowledge about the pathogenesis of this disease and generating means for the development of strategies that intervene in the infectious process and assist in the control and eradication of this disease.