CARACTERIZAÇÃO E BIOCOMPATIBILIDADE DE SCAFFOLD DE BURITI (Mauritia flexuosa) PARA CULTIVO DE CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS ASSOCIADAS A FOLÍCULOS OVARIANOS PRÉ-ANTRAIS CAPRINOS

Abstract

RESUMO O desenvolvimento de sistemas de cultivo de folículos ovarianos pré-antrais (FOPA) com células-tronco pode reduzir o estresse oxidativo, por meio dos secretomas liberados por essas células, que são pequenas moléculas constituídas por agentes antioxidantes, fatores de crescimento e quimiocinas o que pode favorecer o desenvolvimento desses folículos. Os FOPA poderiam ser beneficiadas por serem estruturas celulares de elevada exigência metabólica, que se desenvolvem mediante interação com radicais oxidativos e peptídeos bioativos, tornando seu cultivo in vitro complexo e oneroso. O óleo do buriti, palmeira típica da região norte-nordeste, apresenta baixo custo de extração e relevantes propriedades antioxidantes, denotando potencial para a utilização em cultivo celular. Este trabalho tem como objetivo caracterizar física e quimicamente o scaffold de óleo de buriti (SB), avaliar a bioincorporação com células-tronco mesenquimais e o efeito em sistema de co-cultivo com folículos ovarianos pré-antrais (FOPA) caprinos. Para caracterização do SB foram realizadas a espectroscopia na região do Infravermelho (FTIR) e Análise Termogravimétrica (TG e DTG). Analisadas a morfologia e adesão celular por meio da microscopia eletrônica de varredura (MEV) e técnicas histológicas. Para avaliar a biocompatibilidade foram empregados os testes de MTT e atividade hemolítica. A capacidade de ativação de células do sistema imune foi mensurada pelos testes de capacidade fagocítica e síntese de oxido nítrico. Os FOPA caprinos foram cultivados a partir de fragmentos do córtex ovariano, dos quais um deles foi imediatamente fixado em carnoy (controle fresco). Os demais fragmentos, foram cultivados por 1 e 7 dias em placas de cultura na presença ou ausência do scaffold de buriti com células-tronco da geleia de Wharton (SB-CTMGW). Após o cultivo os fragmentos ovarianos foram fixados em carnoy para exame histológico. Quanto à caracterização, o SB apresenta composição amorfa, alta estabilidade térmica e alta capacidade de expansão em água. Em relação à morfologia, demonstra superfície com micro e macroporos e boa adesão de CTMGW. Foi observada a ausência de citotoxicidade e atividade hemolítica, e o SB não estimulou a ativação de macrófagos. Os folículos pré-antrais foram morfologicamente classificados em primordiais ou folículos em desenvolvimento. O grupo cultivado tratamento apresenta a maior redução das porcentagens de folículos primordiais (p <0,05), e as porcentagens de folículos em desenvolvimento, aumentaram (p <0,05), comparando-os, ao grupo controle. Em conclusão o co-cultivo de células-tronco da geleia de Wharton sob scaffold de buriti mantém a estrutura e promove a ativação e o crescimento in vitro de folículos ovarianos pré-antrais caprinos, apesar de reduzir a viabilidade folicular. ABSTRACT The development of preantral ovarian follicular (POF) culture systems with stem cells can reduce oxidative stress by means of the secretasomes released by these cells, which are small molecules composed of antioxidants, growth factors and chemokines. may favor the development of these follicles. POF could benefit from being highly metabolic cellular structures that develop through interaction with oxidative radicals and bioactive peptides, making their in vitro culture complex and costly. Buriti oil, a typical palm of the north-northeast region, presents low extraction costs and relevant antioxidant properties, denoting potential for use in cell culture. The aim of this work was to characterize the scaffold of buriti oil (SB), to evaluate the bioincorporation with mesenchymal stem cells and the effect on co-culture with preantral ovarian follicles (goat's POF). To characterize the SB were the Infrared Spectroscopy (FTIR) and Thermogravimetric Analysis (TG and DTG). The morphology and cellular adhesion were analyzed through scanning electron microscopy (SEM) and histological techniques. MTT tests and hemolytic activity were used to evaluate the biocompatibility. The activation capacity of cells of the immune system was measured by tests of phagocytic capacity and synthesis of nitric oxide. Goat POF were cultured from fragments of the ovarian cortex, one of which was immediately fixed in carnoy (fresh control). The remaining fragments were cultured for 1 and 7 days in culture plates in the presence or absence of buriti scaffold with Wharton jelly mesenquimal stem cells (SB-CTMGW). After culture the ovarian fragments were fixed in carnoy for histological examination. Regarding the characterization, the SB has amorphous composition, high thermal stability and high water expansion capacity. In relation to the morphology, it shows micro and macropore surfaces and good adhesion of CTMGW. The absence of cytotoxicity and hemolytic activity was observed, and SB did not stimulate the activation of macrophages. Preantral ovarian follicles were morphologically classified into primordial or developing follicles. The cultivated treatment group showed the greatest reduction in the percentages of primordial follicles (p <0.05), and the percentages of developing follicles increased (p <0.05), comparing them to the control group. In conclusion, the co-cultivation of mesenquimal stem cells from Wharton jelly under buriti scaffold maintains the structure and promotes the activation and in vitro growth of preantral follicles of goat preantral, although reducing follicular viability.