CONTRIBUIÇÃO AO CONHECIMENTO QUÍMICO E BIOLÓGICO DAS FOLHAS DE SENNA ACURUENSIS (BENTH.) IRWIN & BARNEBY (FABACEAE)

Abstract

RESUMO: Senna acuruensis (Benth.) Irwin & Barneby (Fabaceae), é uma espécie apícola, conhecida popularmente como canela de velho ou besouro. Este trabalho relata os constituintes químicos isolados e identificados na fração hexânica (FHSa), proveniente do extrato etanólico (EESa), a quantificação dos flavonoides rutina e quercetina nos extratos etanólico e aquoso (EASa) e fração hidrometanólica (FHMSa) das folhas desta espécie, bem como a avaliação do potencial biológico dos extratos e frações. O fracionamento cromatográfico da FHSa resultou no isolamento do diterpeno: 3,7,11,16-tetrametil-hexadecan- 1,2-diol (1), dos triterpenoides: esqualeno (2), lupeol (3), α-amirina (4), β-amirina (5), germanicol (6), ácido canárico (7), ácido 3,4-secogermanican-3-oico (8) e ácido nictântico (9), dos esteroides: sitosterol (10) e estigmasterol (11), dos acilglicosilesterois: 6-O-miristil-β- D-glicosil-3-O-sitosterol (12a), 6-O-palmitoil-β-D-glicosil-3-O-sitosterol (12b), 6-Omargaril- β-D-glicosil-3-O-sitosterol (12c), 6-O-linoleil-β-D-glicosil-3-O-sitosterol (12d), 6- O-oleoil-β-D-glicosil-3-O-sitosterol (12e), 6-O-estearil-β-D-glicosil-3-O-sitosterol (12f), 6-Omiristil- β-D-glicosil-3-O-estigmasterol (13a), 6-O-palmitoil-β-D-glicosil-3-O-estigmasterol (13b), 6-O-margaril-β-D-glicosil-3-O-estigmasterol (13c), 6-O-linoleil-β-D-glicosil-3-Oestigmasterol (13d), 6-O-oleoil-β-D-glicosil-3-O-estigmasterol (13e), 6-O-estearil-β-Dglicosil- 3-O-estigmasterol (13f), da mistura ésteres de ácidos e alcoois graxos (14) e dos terpenos: sabineno (15), mirceno (16), car-3-eno (17), p-cimeno (18), limoneno (19), trans-β- ocimeno (20), β-elemeno (21), β-cariofileno (22), (+)-aromadendreno (23), aloaromadendreno (24), β-selineno (25), valenceno (26), cis-farnesol (27), neofitadieno (28) e E-fitol (29). As estruturas dos compostos foram identificadas por métodos espectroscópicos de RMN 1H e 13C, CG-EM e por comparação com dados da literatura. Um método para quantificação dos flavonoides quercetina e rutina por cromatografia líquida de alta eficiência com detector de arranjo de diodos foi desenvolvido e validado com base na Resolução RE nº 899/2003 da ANVISA. As curvas analíticas foram construídas com os padrões de quercetina (10-110 μg mL-1) e rutina (25-200 μg mL-1) e apresentaram boa linearidade (r=0,999) e seletividade, com resultados satisfatórios de precisão e exatidão. O EASa (54,52±0,47 mg g-1), EESa (55,18±1,05 mg g-1) e FHMSa (92,07±0,50 mg g-1) apresentaram altos teores de rutina. Os teores de quercetina foram 11,56±0,03 e 24,88±0,43 mg g-1 para o EESa e FHMSa, respectivamente. No ensaio de sequestro do radical DPPH a FHMSa apresentou o maior percentual de atividade antioxidante (CE50=216,00±3,8 μg mL-1) e teores de flavonoides (495,02±6,30 mg ER g-1) e de fenois totais (173,46±5,27 mg EAG g-1), estatisticamente equivalente ao do EASa. O extrato hexânico (EHSa), EASa e FHSa apresentaram citotoxicidade moderada frente à linhagem de células tumorais SF-295 (glioblastoma). Com exceção do EASa, os demais extratos e frações apresentaram indicativo de inibição da enzima acetilcolinesterase no ensaio em cromatografia em camada delgada e revelação com reagente de Ellman. Todos os extratos e frações foram inativos no ensaio leishimanicida. Este é o primeiro relato da ocorrência dos 3,4-secotriterpenos (7-9) e acilglicosilesterois (12a-12f e 13a-13f) no gênero Senna, de 13a, 13c e 13e na literatura e do composto 1 em plantas, bem como das atividades biológicas investigadas nesta espécie. ABSTRACT: Senna acuruensis (Benth.) Irwin & Barneby (Fabaceae) is a species popularly known as “canela de velho” or “besouro”. This paper reports the isolated chemical constituents and identified in the hexane fraction (FHSa) from the ethanol extract (EESa), quantification of flavonoids rutin and quercetin in ethanolic and aqueous extracts (EASa) and hydromethanol fraction (FHMSa) of the leaves this species, and the evaluation of the biological potential of extracts and fractions. Chromatographic fractionation of the FHSa resulted in the isolation and identification of diterpene: 3,7,11,16-tetramethyl-hexadecan-1,2- diol (1) of the triterpenoid derivatives and squalene (2), lupeol (3) α-amyrin (4), β-amyrin (5), germanicol (6), canaric acid (7), 3,4-secogermanican-3-oic acid (8), nyctanthic acid (9), the steroids: sitosterol (10), stigmasterol (11) of the acylglucosylsterols: 6-O-myristyl-β-Dglucosyl- 3-O-sitosterol (12a), 6-O-palmitoyl-β-D-glucosyl-3-O-sitosterol (12b), 6-Omargaril- β-D-glucosyl-3-O-sitosterol (12c), 6-O-linoleyl-β-D-glucosyl-3-O-sitosterol (12d), 6-O-oleoyl-β-D-glucosyl-3-O-sitosterol (12e), 6-O-stearyl-β-D-glucosyl-3-O-sitosterol (12f), 6-O-myristyl-β-D-glucosyl-3-O-stigmasterol (13a), 6-O-palmitoyl-β-D-glucosyl-3-Ostigmasterol (13b), margaril-6-O-β-D-glucosyl-3-O-estigmasterol (13c) 6-O-linoleyl-β-Dglucosyl- 3-O-stigmasterol (13d), 6-O-oleoyl-β-D-glucosyl-3-O-stigmasterol (13e), 6-Ostearyl- β-D-glucosyl-3-O-stigmasterol (13f) and mixture of esters fatty acids and alcohols (14) and terpenes: sabinene (15), myrcene (16) car-3-ene (17), p-cymene (18), limonene (19) trans-β-ocimene (20), β-elemene (21), β-caryophyllene (22), (+)-aromadendrene (23), alloaromadendrene (24), β-selinene (25), valencene (26), cis-farnesol (27), neofitadien (27) and E-phytol (29). Structures of compounds were identified by spectroscopic methods of 1H and 13C NMR, GC-MS and compared with literature data. A method for quantification of quercetin and rutin by high performance liquid chromatography with diode array detector was developed and validated on the basis of Resolution RE No. 899/2003 of ANVISA. The analytical curves were constructed with quercetin (10-110 μg L-1) and rutin (25-200 μg L-1) standards and showed good linearity (r = 0,999) and selectivity, with satisfactory precision and accuracy. EASa (54,52±0,47 mg g-1), EESa (55,18±1,05 mg g-1) and FHMSa (92,07±0,50 mg g-1) had high concentration of rutin. In radical sequestration assay DPPH the FHMSa had the highest percentage of antioxidant activity (EC50=216,00±3,8 mg L-1) and flavonoid content (495,02±6,30 mg ER g-1) and total phenols (173,46±5,27 mg GAE g-1), statistically equivalent to EASa. The hexane extract (EHSa), EASa and FHSa presented moderate cytotoxicity against tumor cell line SF-295 (glioblastoma). Aside from the EASa, other extracts and fractions were inhibited indicative of the enzyme acetylcholinesterase in test thin layer chromatography and developing with Ellman reagent. All extracts and fractions were inactive in leishimanicidal test. This is the first report of the occurrence of 3,4-secotriterpenes (7-9) and acylglucosylsterols (12a-12f and 13a-13f) in Senna, 13a, 13c and 13e in the literature, of the compound 1 in plants, as well as biological activities investigated in this species.