SENSOR ELETROQUÍMICO PARA DETECÇÃO DE ORGANISMOS GENETICAMENTE MODIFICADOS: detecção do promotor P35S Tese

Abstract

RESUMO :A demanda por alimentos exige que se tenha cada vez mais produtividade dos cultivares por diversas razões. Essa produtividade pode ser alcançada pelo uso de plantas transgênicas. Os produtos de plantas transgênicas precisam ser controlados e reguladas por Legislação Federal. No Brasil são os Atos do Poder Executivo de 24 de abril de 2003 e o Decreto número 4680, que autorizam o uso de até 1,0% de transgênico. Na União Europeia utiliza-se padrões estabelecidos pela “Comission Regulation” nos decretos de números 1829/2003 e 1830/2003. Este estabelece que produtos alimentícios, os quais contenham organismo geneticamente modificado e estejam autorizados, não podem ter em seu conteúdo, transgênico acima de 0,9%, sob pena de receber a denominação “geneticamente modificado” na lista de ingredientes. A detecção de Organismos Geneticamente Modificados (OGMs) é uma necessidade dos consumidores a fim de resguardar sua saúde. Para a indústria isto significa obedecer a legislação e controlar a qualidade desses produtos alimentícios. O promotor “P35S” é uma sequência procedente do vírus do mosaico da couve-flor, amplamente encontrado em produtos transgênicos, sendo o gene de maior expressão normalmente insertado e expresso como MON 810. A especificidade do ensaio depende de dois pilares: a amplificação isotérmica do DNA dirigida por “primers” específicos; e dos produtos de hibridização por HDA com sondas específicas de captura e indicadora. Os genossensores confeccionados realizam detecção por técnicas eletroquímicas. O método requer um equipamento simples e acessível para detecção in situ. Isso pode ser vantajosamente aplicado para a detecção específica de pequenas quantidades de biomarcadores de ácidos nucleicos em análises diagnósticas, ambientais e alimentares. O sistema que combina HDA e a detectabilidade permite uma detecção do tipo SIM/NÃO, a partir de 30 cópias de DNA. O método oferece uma ferramenta versátil e sensível para a detecção de pequenas quantidades (≈0,5%) de DNA transgênico, não apenas para controle de segurança alimentar, mas também para o diagnóstico e controle de áreas ambientais. ABSTRACT: The need for food demands the crops to increase more and more its productivity for several reasons. This may be accomplished by the use of transgenic plants. Theproducts of transgenic plants need to be controlled and regulated by Federal Law. InBrazil, the Executive Power Acts of 2003 April 24th and the Decrete number 4680 recomend the use of 1,0 % of transgenic at the most. In the European Union, the "Comission Regulation" has stablished standards by the Decrees 1829/2003 and 1830/2003. Both of them determine that authorized food products that contain genetically modified organisms should not be composed by a rate of transgenic constituents higher than 0.9%, which otherwise should be labeled as "genetically modified" in the list of ingredients. The detection of Genetically Modified Organisms (GMOs) is a need of the consumers to maintain their health protected. For the industry, this means to act according to the law and control the quality of its food products. The promoter "P35S" is a sequence that stems from the virus of the cauliflower's mosaic, widely found in transgenic products and one of the most commonly used genes, being usually expressed as MON 810. The particularity of this test stands on two characteristics: the isothermical amplification of the DNA driven by specific "primers"; and the products hybridized by HDA with specific capture and indicating gauges. The genossensors supplied were detected by electrochemical techniques. The method requires a simple and accessible for field detection equipment. This can be beneficially applied for the detection of specific and small amounts of biomarcadores of nucleic acids in diagnostic, environmental and food analysis. The system that combines HDA and detectability allows detection of the kind YES/NO, from 30 copies of DNA. The method offers a versatile and sensibletool for the detection of small amounts (~ 0,5%) of transgenic DNA, not only for the control of food safety, but also for the diagnostic and control of environmental areas.