IMPACTO MORFOPATOLÓGICO DO EXTRATO DE FOLHAS DE GRAVIOLA (ANNONA MURICATA L) NA RESERVA OVARIANA DE CAMUNDONGOS FÊMEAS

Abstract

RESUMO: A utilização de algumas terapias anticâncer, por vezes, está associada à morte de células germinativas, levando a uma extensiva perda da reserva ovariana. Como consequência, as mulheres sofrem aumento da taxa de infertilidade. Dessa forma, a gonadotoxicidade dos quimioterápicos é uma questão importante para mulheres em idade reprodutiva, uma vez que esta pode levar ao esgotamento de seu potencial reprodutivo. Diante do exposto, a necessidade do desenvolvimento de novos fármacos vem aumentando o interesse por substâncias naturais com atividade antitumoral. A Annona muricata, popularmente conhecida como graviola, tem se destacado por sua elevada atividade citotóxica, inclusive em células tumorais de câncer de mama, e por sua especificidade em relação às células tumorais. Contudo, de acordo com nosso conhecimento, ainda não há estudos sobre o efeito dessa planta sobre a reserva ovariana e, consequentemente, sobre a fertilidade feminina. O objetivo desse estudo foi avaliar o impacto do extrato etanólico de folhas de A. muricata sobre a da reserva ovariana de camundongos fêmeas. Para tanto, foram utilizados 24 animais da linhagem Swiss, com idade entre 2 a 3 meses, os quais foram divididos aleatoriamente em quatro grupos experimentais de acordo com a substância a ser administrada: I - solução salina 0,9% (veículo), II - ciclofosfamida (75 mg/kg), III - extrato da folha de graviola (50 mg/kg) e IV - extrato da folha de graviola (100 mg/kg). Ao final, os animais foram eutanasiados e seus ovários e outros órgãos foram coletados e analisados. Foi realizada a análise histológica dos ovários através da avaliação do número de folículos, morfologia folicular e densidade das células do estroma ovariano. Adicionalmente foi realizada a análise anatomopatológica dos diferentes órgãos coletados. Os resultados foram expressos como média e frequência absoluta e considerados significativos quando p ˂ 0,05. Os grupos tratados com o extrato não mostraram morte folicular ou diminuição da densidade das células do estroma em relação ao veículo, enquanto o grupo tratado com a ciclofosfamida mostrou maior número de morte folicular (p ˂ 0,05). Adicionalmente, a análise anatomopatológica dos órgãos dos animais tratados com o extrato 50 mg/kg não apresentou alterações distinguíveis em relação ao veículo. Em contrapartida, os grupos do extrato 100 mg/kg e da ciclofosfamida apresentaram alterações histológicas no fígado comparados ao grupo salina. O grupo ciclofosfamida apresentou, ainda, muco esbranquiçado nos órgãos da cavidade abdominal em contraposição aos demais grupos. Dessa forma, o estudo mostrou que o extrato etanólico de folhas de graviola preservou a reserva ovariana de camundongos fêmeas em ambas as concentrações, não sendo tóxico ao ovário de acordo com os parâmetros utilizados e, ainda, que a dose de 50 mg/kg é a de melhor escolha para estudos posteriores. ABSTRACT: The use of some anticancer therapies is sometimes associated with the death of germ cells, leading to extensive loss of ovarian reserve. As a consequence, women experience increased rate of infertility. Thus, gonadotoxicity of chemotherapeutic agents is an important issue for women of reproductive age, since this may lead to the exhaustion of their reproductive potential. In view of the above, the need for development of new drugs has increased the interest for natural substances with antitumor activity. Annona muricata, popularly known as soursop, has been noted for its high cytotoxic activity, including breast cancer tumor cells, and for its specificity in relation to tumor cells. However, according to our knowledge, there are no studies on the effect of this plant on the ovarian reserve and, consequently, on female fertility. The objective of this study was to evaluate the impact of the ethanolic extract of leaves of A. muricata on the ovarian reserve of female mice. For this purpose, 24 Swiss animals were used, aged 2 to 3 months, which will be randomly divided into four experimental groups according to the substance to be administered: I - saline solution 0.9% (vehicle), II - cyclophosphamide (75 mg / kg), III - graviola leaf extract (50 mg / kg) and IV – soursop leaf extract (100 mg / kg). At the end, the animals were euthanized and their ovaries and other organs were collected and analyzed. Was performed the histological analysis of the ovaries through the evaluation of the number of follicles, follicular morphology and density of ovarian stromal cells. Additionally, was performed the anatomopathological analysis of the different organs collected. The results were expressed as mean and absolute frequency and considered significant when p ˂ 0.05. The groups treated with the extract did not show follicular death or decreased stromal cell density in relation to the vehicle, while the cyclophosphamide treated group showed a higher number of follicular death (p ˂ 0.05). In addition, anatomopathological analysis of the organs of the animals treated with the 50 mg / kg extract did not show any distinguishable changes in relation to the vehicle. In contrast, the 100 mg / kg extract and cyclophosphamide groups presented histological changes in the liver compared to the saline group. The cyclophosphamide group also had whitish mucus in the organs of the abdominal cavity in contrast to the other groups. Thus, the study showed that the ethanolic extract of soursoup leaves preserved the ovarian reserve of female mice at both concentrations and was not toxic to the ovary according to the parameters used, and also that the dose of 50 mg / kg is the one of better choice for further studies.