EFICIÊNCIA DE FIXADORES NA ANÁLISE HISTOLÓGICA INTESTINAL E DETERMINAÇÃO HISTOMORFOMÉTRICA DO ÍLEO EM FRANGOS DE CORTE

Abstract

RESUMO: Diante da inconsistência na utilização de fixadores na avaliação histológica de intestinos em frangos de corte e da importância da histomorfometria no estudo nutricional e produtivo nestes animais, objetivou-se o desenvolvimento de dois estudos complementares. A investigação do efeito de cinco fixadores (Álcool 70ºGL, Álcool 50º GL, Bouin, Carnoy e Formol Tamponado a 10%) sobre a preservação tecidual e melhor processamento histológico, e a determinação da localização do íleo em frangos de corte por meio da morfometria microscópica. No primeiro estudo foram coletados de 11 (onze) frangos da linhagem Cobb 500®, aos 24 dias de idade, sob as mesmas condições de manejo e alimentação (formulada à base de milho e farelo de soja). Padronizou-se posição e amostragem de 05 (cinco) fragmentos da alça descendente do duodeno. Em análise de teste cego e único avaliador, cada fragmento no sentido crânio-caudal foi submetido a um tipo de fixador já mencionado acima. Realizou- se procedimento histológico padrão e avaliação quanto à dificuldade de microtomia, qualidade de coloração, preservação das estruturas e presença de artefatos na mucosa e na parede muscular. Os dados obtidos foram submetidos à análise de Kruskal-wallis e ao teste de Mann-whitney. Neste caso a análise de Kruskal-wallis não verificou diferenças significativas quanto a utilização dos diferentes fixadores para as características de microtomia, preservação e presença de artefatos na parede muscular, entretanto diferenças foram verificadas para as características coloração, preservação e presença de artefatos na mucoso intestinal, as quais foram submetidas ao teste de Mann-whitney o qual demonstrou a superioridade do Bouin e Formol tamponado a 10%. No que se refere ao segundo estudo, foram utilizados dez animais da linhagem Cobb 500® nas mesmas condições já descritas, dos quais foram coletados um total de 05 (cinco) fragmentos no sentido jejuno-íleo, sendo 02 (dois) fragmentos da região jejunal anterior ao divertículo de Meckel – 01 (um) JEP – jejuno proximal (imediatamente após a flexura duodenojejunal e 1 (um) JED – jejuno distal (na porção média a flexura e o divertículo de Meckel), e 03 (três) fragmentos subsequentes ao divertículo de Meckel – 01 (um) ILP – íleo proximal (imediatamente após o divertículo), 01 (um) ILM – íleo médio na (posição média entre o divertículo e o ápice dos cecos), e 01 (um) ILP – íleo distal (entre os cecos). Todos foram fixados em Formol tamponado a 10%, submetidos ao procedimento histológico padrão e corados com Hematoxilina e Eosina. Foram avaliadas as características para o vilo – perímetro, altura e largura; para a cripta – altura e largura; para a parede muscular – espessura. Os resultados obtidos foram submetidos à analise descritiva quantitativa e teste de Student-Newman-Keuls (p<0,05). Pela análise descritiva quantitativa verificou-se um comportamento decrescente e contínuo das médias obtidas para vilo- altura e perímetro; para cripta– altura, desde JEP até ILD. Quanto aos resultados obtidos pelo teste de Student-Newman-Keuls (p<0,05), estes caracterizaram 03 (três) regiões distintas significativamente, desde o inicio do jejuno até a porção final do íleo, inserido entre os cecos. A histomorfometria determinou o jejuno se estende ao longo das porções JED, JEM e ILP e o íleo é representado pela região ILD (disposto entre os cecos). Ambos os estudos visaram fornecer um padrão metodológico para pesquisas que envolvam estes procedimentos em frangos de corte. Deste modo, concluiu-se que os fixadores Bouin e Formol tamponado a 10% se apresentaram superiores quanto à preservação, reduzida formação de artefatos e coloração de tecidos intestinais de frango de corte e que a amostragem das áreas de Jejuno e Íleo devem obedecer os pontos denominados jejuno distal (JED) e íleo distal (ILD) para análise histológica destas regiões em estudos de nutrição em frangos de corte. ABSTRACT: In view of the inconsistency in the use of fixatives in the histological evaluation of intestines in broilers and the importance of histomorphometry in the nutritional and productive study in these animals, the objective was to develop two complementary studies. The investigation of the effect of five fixatives (Alcohol 70ºGL, Alcohol 50º GL, Bouin, Carnoy and 10% Buffered Formol) on tissue preservation and better histological processing, and the determination of the location of the ileum in broilers by means of microscopic morphometry . In the first study, 11 (eleven) chickens of the Cobb 500® strain were collected at 24 days of age under the same management and feed conditions (formulated with corn and soybean meal). Position and sampling of 5 (five) fragments of the duodenal descending loop were standardized. In blind and single-valued analysis, each fragment in the craniocaudal direction was subjected to a type of fixative already mentioned above. Standard histological procedure and evaluation of the difficulty of microtomy, color quality, preservation of structures and presence of artifacts in the mucosa and in the muscular wall were performed. The data were submitted to Kruskal-wallis analysis and the Mann-Whitney test. In this case, the analysis of Kruskal-wallis did not verify significant differences in the use of different fixatives for the characteristics of microtomy, preservation and presence of artefacts in the muscular wall, however differences were verified for the characteristics of coloration, preservation and presence of intestinal mucosa artifacts , which were submitted to the Mann-whitney test which demonstrated the superiority of Bouin and Formol buffered to 10%. Regarding the second study, ten animals of the Cobb 500® strain were used in the same conditions described above, from which a total of 05 (five) fragments were collected in the jejunal-ileus direction, with 02 (two) fragments of the jejunal region anterior to the Meckel - 01 (one) JEP - proximal jejunum (immediately after the duodenojejunal flexure and 1 (one) JED - distal jejunum (in the medial portion of the flexure and the Meckel 's diverticulum), and 03 (three) fragments subsequent to the Meckel's diverticulum - 01 (one) ILP - proximal ileus (immediately after the diverticulum), 01 (one) ILM - medium ileus at the midpoint between the diverticulum and the apex of the cecum, and 01 (one) (cecum), all of them were fixed in Formol buffered to 10%, submitted to the standard histological procedure and stained with Hematoxylin and Eosin. to the The results were submitted to quantitative descriptive analysis and Student-Newman-Keuls test (p <0.05). The quantitative descriptive analysis showed a decreasing and continuous behavior of the averages obtained for villi-height and perimeter; for crypt-height, from JEP to ILD. As to the results obtained by the Student-Newman-Keuls test (p <0.05), they characterized 03 (three) distinct regions significantly, from the beginning of the jejunum to the final portion of the ileum, inserted between the cecum. Histomorphometry determined the jejunum extending along the JED, JEM and ILP portions and the ileum is represented by the ILD region (disposed between the cecum). Both studies aimed to provide a methodological standard for research involving these procedures in broilers. Thus, Bouin and Formol buffered 10% fixatives were found to be superior in preservation, reduced artifact formation and staining of broiler chicken intestinal tissues, and that sampling of the Jejuno and Ileum areas should comply with points called distal jejunum (JED) and distal ileum (ILD) for histological analysis of these regions in nutrition studies in broilers.