EFICIÊNCIA DE DUAS TÉCNICAS DE RECUPERAÇÃO DE ESPERMATOZOIDES EPIDIDIMÁRIOS DE CÃES E AVALIAÇÃO SEMINAL IN VITRO UTILIZANDO O DILUIDOR TRIS-GEMA

Abstract

RESUMO: A coleta de espermatozoides epididimários é utilizada, experimentalmente, em diversas espécies animais, sendo um recurso importante em casos de animais de alto valor genético ou de grande estima. O presente trabalho objetivou avaliar a taxa de recuperação de espermatozoides da cauda do epidídimo de cães, utilizando as técnicas de flutuação (FL) e fluxo retrógrado (FR), após a orquiectomia, avaliando a qualidade destes espermatozoides em meio diluidor Tris-gema, a fresco e após a criopreservação. Foram utilizados 30 complexos testículo-epididímos (CTE). O material coletado foi levado para o Laboratório de Biotecnologia da Reprodução - UFPI para a realização das técnicas citadas. Em cada técnica foram testadas quinze amostras de CTE diluídos em Tris-gema. Posteriormente, foram avaliadas as características seminais de motilidade, vigor, concentração e morfologia espermática, além do teste de termorresistência rápida (TTR) nos tempos T0, T30, T60 e T90 minutos após a criopreservação. Foi avaliada a integridade da membrana espermática e do acrossoma com o uso de sondas fluorescentes. Também foi realizada a análise computadorizada do sêmen (CASA). Para a estatística dos dados foram obtidas as médias e desvio-padrão das taxas de recuperação dos espermatozoides epididimários, utilizando a Análise de Variância, através do Programa Statistical Analysis System for Windows (SAS), empregando o teste de Ducan no caso de diferenças significativas entre os grupos testados, sendo considerados significativos quando P<0,05. Dos resultados analisados observou-se que não houve diferença significativa entre os métodos de flutuação e fluxo retrógrado no sêmen fresco e pós-criopreservado em relação aos parâmetros de motilidade e vigor. No TTR a partir do T30 houve influência negativa nestes parâmetros em ambas as técnicas. Para a integridade do acrossoma, o tempo afetou a integridade destas células, também a partir do T30. Já na porcentagem de células com membrana plasmática íntegra do sêmen pós-criopreservado, o tempo não interferiu nas técnicas testadas, mesmo decorridos 90 minutos pós-criopreservação. Com relação à análise do CASA houve diferença estatística no parâmetro seminal de motilidade progressiva entre as técnicas analisadas. Diante do presente experimento conclui-se que as técnicas de recuperação espermática epididimária podem ser utilizadas para a criopreservação de sêmen de cães recentemente castrados, porém mais estudos devem ser realizados para confirmação destes e de novos resultados. ABSTRACT: The collection of epididymal spermatozoa is experimentally used in several animal species, being an important resource in cases of animals of high genetic value or high esteem. The objective of this study was to evaluate the recovery rate of spermatozoa from the tail of the epididymis of dogs, using flotation (FL) and retrograde flow (RF) techniques after orchiectomy, evaluating the quality of these spermatozoa in dilution medium Tris-gem, fresh and after cryopreservation. 30 testis-epididymal complexes (CTE) were used. The collected material was taken to the Reproduction Biotechnology Laboratory - UFPI to perform the mentioned techniques. Fifteen CTE samples diluted in Tris-gem were tested in each technique. Subsequently, the semen characteristics of motile, vigor, concentration and sperm morphology were evaluated, as well as the rapid thermoresistance test (TTR) at T0, T30, T60 and T90 minutes after cryopreservation. The integrity of the spermatic membrane and the acrosome was evaluated with the use of fluorescent probes. A computerized semen analysis (CASA) was also performed. For statistical data, mean and standard deviation of the epididymal sperm recovery rates were obtained using the Statistical Analysis System for Windows (SAS), using the Ducan test in the case of significant differences between the groups tested, being considered significant when P <0.05. From the analyzed results it was observed that there was no significant difference between the flotation and retrograde flow methods in fresh and post cryopreserved semen in relation to the parameters of motility and vigor. In TTR from T30 there was a negative influence on these parameters in both techniques. For the integrity of the acrosome, the time affected the integrity of these cells, also from the T30. In the percentage of cells with full plasma membrane of post-cryopreserved semen, the time did not interfere in the techniques tested, even after 90 minutes post cryopreservation. Regarding the analysis of CASA, there was a statistical difference in the seminal parameter of progressive motility between the techniques analyzed. In the present experiment it is concluded that epididymal sperm retrieval techniques can be used for the cryopreservation of semen from recently castrated dogs, but further studies should be performed to confirm these and new results